综合放血法致小鼠血虚证模型的相关研究

发布时间：2018-03-31 06:31

  本文选题：综合放血法　切入点：血虚证　出处：《北京中医药大学》2005年硕士论文

【摘要】：血虚证是中医临床常见证侯,但是建立贴近于中医临床的药理血虚证模型的文献报道很少。本课题是在采用 (60)~Co γ射线照射和环磷酰胺腹腔注射制作小鼠血虚证模型基础之上,通过慢性放血,限食,游泳建立了综合放血法血虚证模型,并分别从外周血象、细胞周期、(CD34)~+ 细胞数量、造血祖细胞的集落生成能力、骨髓和脾脏细胞凋亡等方面,探讨了综合放血法小鼠血虚证发生发展的机制,旨在完善不同方法建立血虚证模型的实验数据,从而全面,客观的评价中医血虚证模型的病变规律。四物汤是一补血活血调经的经典名方,由熟地黄、当归、白芍、川芎组成,具有确切的疗效。本研究较系统地观察了四物汤对血虚证模型小鼠的防治作用,阐明了四物汤对综合放血法血虚证模型的补血作用的分子机制。 本研究通过每日按 75g.kg~(-1) 体重限食,隔日游泳 20min 及放血 0.4ml 建立综合放血法小鼠血虚证模型,造模共 15d。实验结果显示:小鼠在造模第 9d 左右出现皮毛干燥,光泽差,懒动等不同程度的血虚症象;外周血象红细胞总数及血红蛋白自造模之日起至第 14d 造模结束都是极显著降低;其 (CD34)~+ 细胞比例在第 7,12d 显著高于正常组;骨髓细胞 G0/1期细胞数在第 4,7,21d 极显著低于正常组;而其 S 期细胞数和增殖指数在第 4,7,21d 极显著高于正常组;胸腺及胸腺指数显著降低。 为探讨四物汤预防和治疗综合放血法小鼠血虚证的作用机理,分别在制作模型前后给小鼠灌胃给药。结果表明:四物汤治疗给药促进骨髓细胞的增殖;抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡;增强血虚小鼠的免疫功能。四物汤预防给药的作用更加明显,对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有减少骨髓细胞G2/M阻滞,保护骨髓和促进骨髓细胞由 G1期进入 S 期的效应。促进骨髓造血干祖细胞的增殖能力,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡可能是四物汤治疗综合放血法血虚证的机制之一。 综合放血法,(60)~Coγ 射线照射,环磷酰胺腹腔注射建立的血虚证模型的比较实验结果显示:综合放血法组红细胞和血红蛋白降低明显,(60)~Co γ射线照射组白细胞降低明显,环磷酰胺组白细胞和红细胞降低明显;综合放血组在造模第 15d,(60)~Co γ射线照射组在造模后 7d,环磷酰胺组在造模后第 7d 的 CFU-E,BFU-E,CFU-GM 均显著降低;综合放血组 (CD34)~+ 细胞在第 8,11d 显著升高,(60)~Coγ 射线照射组 CD34+细胞自造模后至第 14d 均显著低于正常组,环磷酰胺组从造模后先升高后降低;三种模型的胸腺指数均显著低于正常组,但是综合放血组脾脏指数显著高于正常组而射线照射组相反。 总的来说,综合放血法指标明确,不需特殊设备,造模主要着眼于直接造成外周血中的细胞数量减少,接近临床中医血虚证。其发生发展的分子机制为:骨髓细胞凋亡,细胞周期紊乱,结果造成骨髓中干祖细胞的能力降低,进而引起外周血象下降。四物汤防治小鼠血虚证的机理为:四物汤提前给药可预防综合放血引起的凋亡,增强免疫力,四物汤治疗给药可促进骨髓细胞增殖能力,增加外周血中的红细胞和血红蛋白。
[Abstract]:Blood deficiency is a common clinical syndrome, but the establishment of pharmacology of blood deficiency model close to the TCM clinical literature is rarely reported. This topic is in the (60) ~Co gamma ray irradiation and cyclophosphamide intraperitoneal injection production based on the mouse model of blood deficiency, chronic bleeding, food restriction, swimming has set up a comprehensive phlebotomy blood deficiency model, and separately from the peripheral blood, cell cycle, (CD34) ~ + cells, hematopoietic progenitor cell colony formation ability, bone marrow and spleen cell apoptosis, discusses the mechanism of phlebotomy blood deficiency of the occurrence and development, in order to improve the experimental data, different methods of establishing the model of blood deficiency and overall. Changes of blood deficiency model objective evaluation of traditional Chinese medicine. Siwu Decoction is a famous prescription of a blood circulation by regulating menstruation, prepared rehmannia root, angelica, Radix Paeoniae Alba, Rhizoma Chuanxiong, has a definite effect. This study systematically The effect of Siwu Decoction on the model mice of blood deficiency syndrome was observed, and the molecular mechanism of the effect of Siwu Decoction on the blood deficiency syndrome model of the comprehensive blood letting method was clarified.
This study through the daily press 75g.kg~ (-1) weight restriction, then 20min and 0.4ml to establish a comprehensive swimming bloodletting bloodletting model of blood deficiency mice model, 15d. experimental results showed that the mice in the model of dry fur, 9D low gloss, lazy and so on the different degree of blood deficiency; peripheral blood count red blood cell and hemoglobin from the model until the date of the 14d at the end of the modeling are decreased significantly; the proportion of (CD34) ~ + cells in the 7,12d group was significantly higher than that of normal bone marrow cells; the number of G0/1 cells in the 4,7,21d was significantly lower than the normal group; while the number of S cells and the proliferation index in the 4,7,21d significantly higher than the normal group; the thymus and thymus index decreased significantly.
To investigate the mechanism of Siwu Decoction in prevention and treatment of comprehensive blood letting of blood deficiency, were given by gavage in mice before and after making models. The results showed that: Siwu Decoction treatment for bone marrow cell proliferation; apoptosis of bone marrow hematopoietic stem progenitor cells; enhance the immune function of blood deficiency mice. Siwu decoction for prevention the role of the drug is more obvious on mouse bone marrow hematopoietic stem cells, peripheral blood cells can obviously promote the recovery of bone marrow cells; reduce G2/M block, protect the bone marrow and bone marrow cells into effect S phase from G1 phase. Bone marrow hematopoietic stem progenitor cell proliferation, inhibition of apoptosis of bone marrow hematopoietic stem progenitor cells may be one of the mechanisms of comprehensive phlebotomy blood deficiency treatment of Siwu Decoction.
Comprehensive phlebotomy, (60) ~Co gamma ray irradiation, blood deficiency model by intraperitoneal injection of cyclophosphamide to establish the comparative experimental results show that the comprehensive bloodletting group of red blood cell and hemoglobin decreased significantly, (60) ~Co gamma ray irradiation group of white blood cells decreased significantly, cyclophosphamide group white cells and red blood cells decreased significantly; comprehensive bleeding group in the modeling of the 15d (60) ~Co gamma ray irradiation group after modeling 7d, cyclophosphamide group at CFU-E, 7d after modeling BFU-E, CFU-GM were significantly reduced; comprehensive bleeding group (CD34) ~ + cells increased significantly in 8,11d (60) ~Co gamma ray irradiation of CD34+ cells from the model group after 14d were significantly lower than normal group, cyclophosphamide group from after the model first increased and then decreased; three models of thymus index were significantly lower than normal group, but the comprehensive index of spleen bleeding group was significantly higher than the normal group and the irradiation group instead.
In general, the comprehensive index of phlebotomy is clear, no need of special equipment, molding mainly focus on directly caused the number of cells in peripheral blood decreased, close to the clinical medicine of blood deficiency. The molecular mechanism of the occurrence and development of bone marrow cells: apoptosis, cell cycle disorder, resulting in reduced ability of stem and progenitor cells in the bone marrow. Which causes the decrease of peripheral blood. The mechanism of Siwu Decoction on mice model of blood deficiency syndrome: apoptosis, early administration of Siwu Decoction can prevent bleeding caused by comprehensive enhance immunity, Siwu Decoction treatment can promote the proliferation of bone marrow cells, red blood cells increased in the peripheral blood and hemoglobin.

【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R-332

【共引文献】

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本文编号：1689569