鼠抗人CD2基因工程抗体嵌合Fab的构建和表达

发布时间：2018-03-31 09:38

  本文选题：CD2　切入点：OX34　出处：《第四军医大学》2006年博士论文

【摘要】：目的：本实验设计引物分别克隆抗人CD2单抗OX34 Fd和轻链基因以及轻、重链可变区基因V_H和V_L，然后将OX34 Fd和轻链基因克隆入噬菌体展示载体pComb3；将轻、重链可变区基因V_L和V_H先后克隆入人-鼠嵌合Fab抗体的通用噬菌体展示载体pComb3C，得到OX34的Fab片段抗体展示载体pComb3／Fab-gⅢ和嵌合Fab片段抗体展示载体pComb3C／cFab-gⅢ，以噬菌体展示Fab抗体的形式对其特异性和亲和力进行验证。之后，切除载体gⅢ序列，构建成OX34—Fab和OX34—cFab的分泌性表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达、纯化，并进行初步的功能鉴定。 方法： 1、鼠抗人CD2抗体轻、重链基因片段的扩增 从杂交瘤细胞株中提取总RNA。设计引物，利用RT-PCR扩增抗体Fd和轻链基因以及轻、重链可变区基因V_H和V_L，得到目的片段。分别连入pMD18—T载体后，进行序列测定，并利用相应的软件对序列进行分析。 2、鼠抗人CD2 Fab片段抗体的制备 将轻链及Fd基因依次克隆到载体pComb3中，建成噬菌体表达载体pComb3／Fab-gⅢ。转化大肠杆菌XL1-blue，并利用辅助噬菌体M13K07进行挽救，，得到噬菌体展示Fab抗
[Abstract]:Objective: to clone the OX34 FD and light chain genes of human CD2 monoclonal antibody and the genes of light and heavy chain variable region VH and VL respectively, and then clone OX34 FD and light chain genes into phage display vector pComb3, and then clone them into the phage display vector pComb3, and then clone them into the phage display vector pComb3, then clone them into the phage display vector pComb3. The heavy chain variable region gene (VSTL) was cloned into the universal phage display vector pComb3C of human-mouse chimeric Fab antibody, and the Fab fragment antibody display vector pComb3/Fab-g 鈪

本文编号：1690165