大鼠骨髓基质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞相关研究
发布时间：2018-04-04 11:29
本文选题：骨髓基质干细胞 切入点：分离纯化 出处：《苏州大学》2007年硕士论文
【摘要】： 第一部分大鼠骨髓基质干细胞的体外分离、培养及定向诱导分化 目的:探索大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)体外分离、培养及纯化的合适实验条件,并探讨其在体外定向诱导分化为神经元样细胞的可行性。 方法:通过密度梯度离心法从成年大鼠骨髓中分离出BMSCs,而后通过贴壁培养法培养并进一步纯化,观察其生长特性;对纯化后的BMSCs使用碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)进行定向诱导分化,并进行免疫细胞化学染色鉴定分化结果。 结果:体外培养的BMSCs传4代后,纯度最高,可达(95.23±3.06)%;其诱导分化7天后,75%的细胞表现为β-TubulinⅢ阳性的神经元样细胞,33%的细胞则为GFAP阳性的胶质细胞。 结论:骨髓基质干细胞在体外培养条件下生长良好,经bFGF㧏EGF诱导后可大量分化为神经元样细胞。 第二部分大鼠骨髓基质干细胞定向诱导分化为神经元样细胞的相关分子机制研究 目的:探索大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)体外定向诱导分化为神经元样细胞所涉及的相关基因,并尝试探讨这些基因在BMSCs诱导分化为神经元样细胞时所起的作用。 方法:体外培养BMSCs至第4代,以bFGF+EGF分别诱导0,4,7天,常规抽提和纯化RNA,采用Affymetrix Rat Expression Array 230 2.0芯片分析诱导前后的基因表达谱改变,找出显著上调及下调的基因。 结果:通过对诱导前后的基因表达谱进行比较,总共找到97条重要表达基因,其中上调2倍以上的基因62条(其中有17条与神经元相关),下调2倍以上的基因35条(其中有7条与神经元相关)。 结论:在BMSCs体外定向诱导分化为神经元样细胞的过程中,至少有24条重要基因参与调控,值得进一步深入研究。
[Abstract]:Part one: isolation, Culture and directional differentiation of Rat Bone Marrow Stromal Stem cells in VitroAim: to explore the suitable conditions for isolation, culture and purification of rat bone marrow stromal stem cells (BMSCs) in vitro, and to explore the feasibility of differentiation into neuron-like cells induced by BMSCs in vitro.Methods: BMSCs were isolated from adult rat bone marrow by density gradient centrifugation.The purified BMSCs was induced by basic fibroblast growth factor (bFGF) and epidermal growth factor (EGF), and the differentiation results were identified by immunocytochemical staining.Results: the purity of BMSCs cultured in vitro was the highest (95.23 卤3.06) after 4 passages, and 75% of the cells showed 尾 -Tubulin 鈪，
本文编号：1709763
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