醋酸铅致神经细胞凋亡的研究

发布时间：2018-04-06 03:22

  本文选题：细胞凋亡　切入点：U-251　出处：《中国协和医科大学》2007年硕士论文

【摘要】： 前言铅是最古老的毒物之一。在现今生活中，由于铅的广泛应用使得铅的污染也广泛存在，虽然我们采取了一些措施来减少铅的影响，但是铅仍然对人体健康造成了很大伤害。铅具有很强的神经毒性，主要表现为铅对未成熟个体学习记忆的损害，使未成年人发生学习记忆功能障碍。铅对神经系统的毒性作用和低浓度铅引发的神经元凋亡有关。神经细胞过度凋亡，，则必然会对中枢神经系统的正常发育和分化造成严重的影响。在体的动物研究已经有结果证明这一现象的存在。我们建立了细胞模型来进一步研究这一作用的分子以及基因机制。我们选用了以前研究中不常见的人神经胶质瘤细胞U-251细胞作为研究对象。 目的建立铅染毒导致U-251细胞凋亡的模型。观察U-251细胞在铅染毒情况下的变化，并确认其发生了细胞凋亡。研究其在凋亡的过程凋亡相关基因的改变。 方法MTT；DNALADDER；细胞荧光染色；基因芯片。 结果 1．U-251细胞的生长曲线。细胞在37℃，5％CO2和饱和湿度的培养箱中培养，接种后每二十四小时进行细胞计数，获得细胞的生长曲线。从曲线可知，U-251细胞的倍增时间约为24小时，第1d细胞处于停滞期：第2—6d细胞处于对数生长期；第7—8d细胞处于平台期，此时的细胞由于数量太多，互相接触，导致接触抑制，生长速度变慢，开始死亡，数量有所减少。 2．使用MTT法测定醋酸铅作用于U-251细胞的时间浓度曲线，并使用SPSS软件对实验结果进行方差检验。试验的结果说明，醋酸铅能够明显抑制细胞的生长，这种抑制作用与醋酸铅的作用时间和作用剂量都呈正相关的关系。其IC50在0.2mmol／L附近。随着作用时间的增加，各作用剂量组之间的差异也更加明显。 3．U-251细胞凋亡的确定以及醋酸铅作用时间和浓度的确定。在醋酸铅的作用下，U251细胞确实发生了细胞凋亡，这种导致凋亡的作用随着作用剂量和作用时间的增加而增强。综合MTT的结果和本部分对细胞凋亡的检测试验结果，确定下一步试验的作用条件为醋酸铅浓度为0.5mmol／L，作用时间为72小时。 4．U-251细胞凋亡的基因芯片分析。基因芯片的结果显示在醋酸铅的作用下有CCND1，PARP1表达下调；TNFRSF10B，GADD45A，PSEN2，HSPA5，Bax，p21表达上调。 结论 醋酸铅通过多种基因通路促使细胞发生凋亡并影响学习记忆的功能。
[Abstract]:Lead is one of the oldest poisons.In modern life, lead pollution is also widespread due to the widespread use of lead. Although we have taken some measures to reduce the impact of lead, lead still causes great harm to human health.Lead has strong neurotoxicity, mainly because of the damage of lead to learning and memory of immature individuals, which makes minors have learning and memory dysfunction.The toxicity of lead to the nervous system is related to the apoptosis of neurons induced by low concentration of lead.Excessive neuronal apoptosis will inevitably have a serious impact on the normal development and differentiation of the central nervous system.Animal studies in vivo have shown the existence of this phenomenon.We have established cell models to further study the molecular and genetic mechanisms of this action.We selected human glioma cell U-251 cells, which were not common in previous studies.Objective to establish a model of U-251 cell apoptosis induced by lead exposure.The changes of U-251 cells under lead exposure were observed and apoptosis was confirmed.To study the changes of apoptosis-related genes in the process of apoptosis.Methods MTT DNA LADDER; cell fluorescence staining; gene chip.ResultThe growth curve of 1.U-251 cells.The cells were cultured in a incubator of 37 鈩

本文编号：1717754