CRMP-1-phrGFP II-N真核表达载体的构建及其对突起生长的调节

发布时间：2018-04-08 10:39

  本文选题：坍塌反应调节蛋白-1　切入点：真核表达载体　出处：《暨南大学》2007年硕士论文

【摘要】： 目的：构建CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体，探讨坍塌反应调节蛋白-1(Collapsin Response Mediator Protein-1，CRMP-1)过表达情况下对细胞突起生长的影响。 材料与方法：取新生6d SD大鼠脑海马组织，提取总RNA，用RT-PCR的方法扩增目的基因cDNA，将其克隆到PGEM-T Easy载体上，经测序正确后再亚克隆到phrGFPⅡ-N真核表达载体，大量提取质粒。用NGF诱导PC12细胞分化为神经元样细胞，脂质体法瞬时转染CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体，通过绿色荧光蛋白示踪的方法对其表达部位进行亚细胞定位，并观察PC12细胞的表型变化。 结果：1)成功扩增CRMP-1基因cDNA，构建了CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体，经测序与genebank的序列同源性为99.8％。2)未经NGF诱导的PC12细胞有3～5个突起，突起短小、分支少，增殖迅速。经NGF诱导后的PC12细胞突起明显变长，分支增多，增殖缓慢。3)脂质体法瞬时转染后，空载体转染组的细胞显示较强的绿色荧光，胞体和突起内均有荧光分布，胞体和突起末端的荧光较中段突起内强，，细胞突起和分支与空白对照组细胞无明差异。CRMP-1-phrGFPⅡ-N转染组，其荧光较空载体组弱，但其分布与空载体转染组相似。该组细胞突起明显短小，仅有个别阳性细胞具有超过胞体直径数倍的突起，但仍较空载体组短小。突起再分支级数少，仅1～2级分支。 结论：1)成功构建了CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体。2)CRMP-1表达于PC12细胞的胞体和突起。3)CRMP-1过表达时细胞突起短小且再分支级数少，表明CRMP-1可能具有抑制突起生长和分支的作用。
[Abstract]:Aim: to construct CRMP-1-phrGFP 鈪

本文编号：1721247