新型抗HIV蛋白CVN的制备及生物活性研究

发布时间：2018-04-10 09:12

  本文选题：抗病毒蛋白　切入点：原核表达　出处：《吉林大学》2007年硕士论文

【摘要】： 以已有的大肠杆菌及酵母生物特性和分子背景为依据,在不改变开放阅读框架(ORF)的情况下,对所获得的CVN序列列进行密码子优化和定点突变,采用全基因合成的方法,人工合成CVN的全序列。为了增强对病毒的中和活性,本实验借助InsightⅡ生物信息学分析软件,在对CVN空间结构进行同源模建的基础上,用一个含有15个氨基酸的linker将两个CVN基因进行串联构建成2CVN。分别克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,获得pET-CVN和pET-2CVN原核表达质粒。 利用大肠杆菌表达系统,对CVN和2CVN基因进行了表达。表达的目的蛋白主要以包涵体形式存在。通过NI2+亲和层析的方法对包涵体成功地进行了复性和纯化。 为进一步检测重组蛋白的生物活性,将HIV外膜糖蛋白基因gp160和gp120连入真核表达载体pDisplay中,转染Hela细胞,人工制备HIV靶细胞模型。G418筛选,SDS-PAGE,Western blot与IFA分析表明成功获得稳定表达HIV-gp160和HIV-gp120的靶细胞模型。通过ELISA和IFA技术对CVN和2CVN的结合活性进行检测,结果表明二者均可与外膜糖蛋白结合,并且初步判定2CVN蛋白的结合活性高于CVN蛋白。该结果为进一步研究抗HIV制剂奠定了坚实的基础。
[Abstract]:Based on the biological characteristics and molecular background of Escherichia coli and yeast, and without changing the open reading frame (ORF), the CVN sequence was optimized for codon optimization and site-directed mutation, and the whole gene synthesis method was used.The entire sequence of synthetic CVN.In order to enhance the neutralization activity of CVN, two CVN genes were constructed by using a 15-amino acid linker on the basis of homologous modeling of CVN spatial structure with the help of Insight 鈪，

本文编号：1730588