问号钩端螺旋体主要外膜蛋白免疫功能表位及其致炎作用的研究

发布时间：2018-04-14 19:28

本文选题：钩端螺旋体 + 问号/致病力　；参考：《浙江大学学报(医学版)》2005年01期

【摘要】：目的 :了解问号钩端螺旋体 (简称钩体 )主要外膜蛋白 Omp L 1、Lip L 32和 L ip L 4 1免疫功能表位及其致炎作用。方法 :建立 Ni- NTA亲和层析法 ,提取不同基因型表达的目的重组蛋白 r Omp L1/ 1和 Omp L1/ 2、L ip L32 / 1和 r Lip L32 / 2、Lip L4 1/ 1和 r Lip L4 1/ 2。采用 SDS- PAGE检测上述目的重组蛋白的表达情况和提取物纯度。分别采用 Signal P3.0预测服务器 Signal P- NN软件、Propred MHC class- binding peptide prediction- Pro Pred预测服务器 EMBOSS软件 ,对上述蛋白的信号肽、MHC- 类分子结合肽和 B细胞表位进行分析。以人脐静脉内皮细胞株EVC- 30 4为效应细胞 ,采用 EL ISA检测上述目的重组蛋白诱导人脐静脉内皮细胞 EVC- 30 4分泌 IL - 1、IL - 8和TNF- α的作用。结果 :在 IPTG诱导下 ,所构建的原核表达系统可有效表达 r Omp L1/ 1和 r Omp L1/ 2、r Lip L32 / 1和r Lip L32 / 2、r L ip L4 1/ 1和 r Lip L4 1/ 2 ,其产量分别约占细菌总蛋白的 30 %和 15 %、4 0 %和 35 %、15 %和 10 %。提纯后的目的重组蛋白 SDS- PAGE后均仅见单一的蛋白条带。Omp L1s、Lip L32 / 1和 Lip L32 / 2、Lip L4 1s的信号肽分别位于 N端 1- 2 4、1- 2 1和 1- 2 4、1- 2 4位氨基酸残基。 Omp L 1s、Lip
[Abstract]:Aim: to investigate the immunoreactive epitopes of Leptospira interrogans (Leptospira interrogans) and their inflammatory effects.Methods: Ni- NTA affinity chromatography was established to extract the recombinant proteins r Omp L 1 / 1, Omp L 1 / 2 LP L 32 / 1 and r Lip L 32 / 2 Lip L 41 / 1 and r Lip L 41 / 1 and r Lip L 41 / 1 expressed in different genotypes.SDS- PAGE was used to detect the expression and purity of the recombinant protein.The Signal P3.0 predictive server Signal P- NN was used to analyze the signal peptide MHC-like binding peptides and B cell epitopes of the above proteins. The EMBOSS software was used to predict the class- binding peptide prediction-Pro Pred.Human umbilical vein endothelial cell line EVC-304 was used as effector cell line. The effect of recombinant human umbilical vein endothelial cell line EVC-304 on secretion of IL-1 IL-8 and TNF- 伪 was detected by El ISA.Results: the constructed prokaryotic expression system could effectively express r Omp L 1 / 1 and r Omp L 1 / 2 r Lip L 32 / 1 and r Lip L 32 / 2 r LP L 41 / 1 and r Lip L 41 / 2 under IPTG induction.Its yield was about 30% and 15% of the total bacterial protein, respectively, and 35% and 10% of the total bacterial protein, respectively.After purification of SDS- PAGE, only a single protein band. MMP L 1s Lip L 32 / 1 and Lip L 32 / 2 Lip L 41 s signal peptides were found at N-terminal 1-2 4G 1-21 and 1-24N 1- 24 amino acid residues, respectively.Omp L 1s,Lip
【作者单位】：浙江大学医学院病原生物学教研室浙江大学医学院病原生物学教研室绍兴文理学院医学院浙江大学医学院病原生物学教研室
【基金】：国家自然科学基金项目 (39970 6 78)
【分类号】：R392

【参考文献】