碱性成纤维细胞生长因子及维生素C对骨髓间充质干细胞增殖的影响

发布时间：2018-04-16 22:21

  本文选题：骨髓间充质干细胞 + 增殖　； 参考：《中国医科大学》2005年硕士论文

【摘要】：实验目的 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类存在于骨髓间质中具有多向分化潜能的干细胞。近年应用MSCs移植修复中枢神经系统损伤和治疗神经系统的各种疾病已成为神经科学研究热点。然而成体骨髓中MSCs的比例非常小,并且在体外培养MSCs过程中其增殖和分化率均有所下降。这些都限制了MSCs在细胞和基因治疗中的应用。 本实验单独及联合应用碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)和维生素C作用于体外培养的MSCs,以寻求体外快速、大量增殖MSCs的有效方法,并将增殖后的MSCs移植入大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠体内检测其在体内的生长情况。从而为神经系统疾病的治疗中提供足够数量具有高生物学活性的MSCs种子细胞提供新的思路。 实验方法 1.体外分离纯化MSCs,进行原代和传代培养。取第3代MSCs根据培养液中加入不同影响因子分为4组:(1)对照组(2)维生素C组(3)bFGF组(4)维生素C+bFGF组。继续培养,逐日观察各组细胞的生长状况和形态变化特点。 2.免疫细胞化学技术测定各组细胞表面抗原CD29、CD34、CD44的表达,判定所培养细胞中是否存在造血细胞和内皮细胞的污染。 3.将第3代MSCs接种在24孔板和96孔板内,根据分组加入相应浓度维生素C和bFGF进行培养,绘制各组细胞的生长曲线。MTT法测定1、2、3、5和7天吸光度A值,结果进行统计学分析。
[Abstract]:Experimental purposeBone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) is a kind of stem cells with multiple differentiation potential in bone marrow mesenchymal cells.In recent years, the application of MSCs transplantation in the repair of central nervous system injury and the treatment of various diseases of the nervous system has become a research hotspot in neuroscience.However, the proportion of MSCs in adult bone marrow was very small, and the proliferation and differentiation rate of MSCs decreased in vitro.All these limit the application of MSCs in cell and gene therapy.In this study, the effects of basic fibroblast growth factor basic FGF1 and vitamin C on cultured MSCs in vitro were studied in order to find an effective method for rapid proliferation of MSCs in vitro.The proliferated MSCs was transplanted into middle cerebral artery occlusion (MCAO) rats.This provides a new idea for the treatment of nervous system diseases to provide a sufficient number of MSCs seed cells with high biological activity.Experimental method1.MSCs were isolated and purified in vitro for primary and passage culture.The third generation of MSCs was divided into 4 groups: 1) control group (2)) vitamin C group (4) vitamin C bFGF group.The cell growth and morphological changes were observed day by day.2.Immunocytochemistry was used to detect the expression of CD29, CD34, CD44, and to determine whether hematopoietic cells and endothelial cells were contaminated in the cultured cells.3.The third generation of MSCs was inoculated in 24-well plate and 96-well plate. The cells were cultured with vitamin C and bFGF. The growth curve of each group was plotted. The absorbance A values of 1, 2, 3 and 7 days were measured by MTT method. The results were statistically analyzed.
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R329.2

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