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抗A型肉毒毒素卵黄抗体的制备、纯化及活性检测

发布时间:2018-04-18 01:26

  本文选题:肉毒梭菌毒素 + A型 ; 参考:《军事医学》2014年03期


【摘要】:目的制备特异性的抗A型肉毒毒素(BoNT/A)的卵黄抗体(IgY)并分析抗体的生物活性。方法人工合成密码子优化BoNT/A重链碳端蛋白(AHc)基因片段,并构建含有该目的片段的重组表达质粒pTIG-Trx-AHc。诱导表达的AHc蛋白经纯化定量后免疫健康母鸡,4次免疫后通过水稀释和硫酸铵盐析法从鸡蛋中提取特异性IgY。在小鼠模型中测定纯化后IgY的中和能力。结果和结论 AHc蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,占菌体裂解液上清的20%。纯化后的IgY纯度较高,效价超过1∶100 000。小鼠体内中和实验证实,IgY可完全中和20LD50A型天然肉毒毒素,在预防和治疗肉毒中毒表现出良好的应用前景。
[Abstract]:Objective to prepare a specific egg yolk antibody against botulinum toxin type A (Bot / A) and analyze its biological activity.Methods the BoNT/A heavy chain carbon terminal protein (BoNT/A) gene fragment was optimized by synthesizing codon and the recombinant expression plasmid pTIG-Trx-AHcwas constructed.The induced expression of AHc protein was purified and quantified and then immunized for 4 times. The specific AHc protein was extracted from eggs by water dilution and ammonium sulfate salting-out method.The neutralization ability of purified IgY was determined in mouse model.Results and conclusion the soluble expression of AHc protein was obtained in Escherichia coli, accounting for 20% of the supernatant of the cell lysate.The purity of purified IgY was higher than 1: 100 000.Neutralization experiments in mice showed that IGY can neutralize 20LD50A type natural botulinum toxin completely and has a good application prospect in prevention and treatment of botulism.
【作者单位】: 军事医学科学院微生物流行病研究所;
【基金】:全军“十二五”重大专项资助项目(AWS11C001)
【分类号】:R392

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

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2 于蕊;孙志伟;俞炜源;;肉毒毒素中和抗体的研究进展[J];生物技术通讯;2008年04期

【共引文献】

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10 赵姝静;李丹丹;朱颖;韩林林;李金萍;杜元策;孟相秋;师东方;;抗大肠杆菌肠毒素卵黄抗体的制备和鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;2014年09期

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1 代U,

本文编号:1766198


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