假单胞菌TS1138由DL-ATC转化L-半胱氨酸关键酶基因的克隆与表达

发布时间：2018-04-29 05:12

  本文选题：假单胞菌TS1138 + 基因克隆　； 参考：《沈阳药科大学》2005年硕士论文

【摘要】：本研究室从土壤中筛选获得了一株假单胞菌TS1138，可转化DL-ATC合成L-半胱氨酸。本论文对代谢途径中的两种转化酶基因和一种分解酶基因在基因克隆和表达等方面进行了研究，研究结果如下： 以pBluescript SKⅡ为载体，以大肠杆菌w3110 cysB~-为受体菌，鸟枪法成功构建TS1138菌株的基因组随机文库，建立特异性筛选模型从中获得两段基因，并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)。通过对重组蛋白的功能鉴定可知，，这两段基因分别为L-ATC水解酶基因和S-氨甲酰-L-半胱氨酸酰胺水解酶基因。实验从分子水平上验证了假单胞菌由DL-ATC酶法合成L-半胱氨酸S-代途径的正确性。 以NCBI上收录的脱巯基酶基因为参考，自行设计引物，以TS1138菌株基因组DNA为模板，扩增得到一段基因，并表达于大肠杆菌BL21(DE3)内。通过活性检测对重组蛋白进行功能鉴定可知该基因为L-半胱氨酸脱巯基酶基因。
[Abstract]:A strain of Pseudomonas sp. TS1138 was obtained from soil in our laboratory, which can transform DL-ATC to synthesize L-cysteine. In this paper, two invertase genes and one catabolic enzyme gene in metabolic pathway were studied in gene cloning and expression. The results are as follows: Using pBluescript SK 鈪

本文编号：1818532