CXCR4基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2018-06-02 23:06

  本文选题：趋化因子受体 + 慢病毒　； 参考：《华中科技大学学报(医学版)》2014年01期

【摘要】：目的探讨构建大鼠趋化因子受体4(CXCR4)基因过表达慢病毒载体的技术方法并检测其体外表达目的基因的水平。方法设计CXCR4基因引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增CXCR4基因片段;用AgeⅠ酶切GV208载体;通过连接酶将CXCR4基因片段连接至线性化的GV208载体上;运用PCR方法鉴定阳性克隆的CXCR4-GV208载体;按GV208慢病毒包装试剂盒说明书包装慢病毒并运用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法行滴度检测;然后用重组慢病毒转染293T细胞(人胚肾细胞),观察GFP表达。结果通过PCR成功地扩增了CXCR4基因片段并连接到了GV208病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定,证明CXCR4-GV208质粒构建正确,重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达。包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108 TU/mL。结论成功构建CXCR4-GV208慢病毒载体,为CXCR4基因的后期研究提供了实验基础。
[Abstract]:Objective to investigate the technique of constructing rat chemokine receptor 4 (CXCR4) gene overexpression lentivirus vector and to detect the expression level of its target gene in vitro. Methods CXCR4 gene primers were designed, CXCR4 gene fragments were amplified by polymerase chain reaction (PCR), GV208 vector was digested with Age 鈪，

本文编号：1970536