呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其新型免疫层析检测试纸条的制备

发布时间：2018-06-04 18:30

  本文选题：呋喃唑酮 + 代谢物　； 参考：《中国生物制品学杂志》2014年07期

【摘要】：目的制备呋喃唑酮代谢物AOZ单克隆抗体及其胶体金与荧光淬灭免疫层析试纸条。方法将AOZ衍生成CPAOZ后,与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原CPAOZ-BSA,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,共5次,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。利用获得的抗CPAOZ单克隆抗体制备胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度及特异性进行验证。结果制备的完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功。共获得3株能稳定分泌抗CPAOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中效价和特异性最好的1株2H11针对CPAOZ的50%抑制质量浓度(IC50)为0.88 ppb。以该抗体制备的胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条的最低检测限分别为7.5和0.062 5 ppb;两种试纸条与其他3种硝基呋喃类代谢物CPAMOZ、CPAHD、CPSEM均不存在交叉反应。结论成功制备了抗CPAOZ单抗及其胶体金免疫层析和荧光淬灭免疫层析试纸条,两种试纸条均具有较高的灵敏度和较强的特异性,其中荧光淬灭免疫层析试纸条的灵敏度较胶体金免疫层析试纸条高约100倍,具有良好的应用前景。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody to furazolidone metabolite AOZ, colloidal gold and immunochromatographic strip. Methods AOZ was derived into CPAOZ and conjugated with the carrier protein BSA to prepare the complete antigen CPAOZ-BSA.The BALB/c mice were immunized by subcutaneous multi-point injection for 5 times. The hybridoma cell lines secreting specific antibodies were obtained by fusion of mouse spleen cells with SP2/0 cells. The colloidal gold and immunochromatographic strip were prepared by using the obtained monoclonal antibody against CPAOZ, and the sensitivity and specificity of the strip were verified. Results the complete antigen was successfully coupled by UV scanning. Three hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against CPAOZ were obtained, of which the 50% inhibitory mass concentration (IC50) of 2H11 against CPAOZ was 0.88 ppb. The minimum detection limits of colloidal gold and fluorescent quenched immunochromatographic strips were 0.062 ppb and 0.062 ppb, respectively, and there was no cross reaction between the two strips and the other three nitrofuran metabolites CPAMOZ CPA HDCPSEM. Conclusion the anti CPAOZ monoclonal antibody and its colloidal gold immunochromatography and fluorescence quenching immunochromatographic strips were successfully prepared. Both of them have high sensitivity and specificity. The sensitivity of immunochromatographic strip is about 100 times higher than that of colloidal gold immunochromatographic strip.
【作者单位】： 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室;
【基金】：第47批教育部留学归国人员科研启动基金
【分类号】：R392-33

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本文编号：1978423