人部分细胞株中neuritin表达检测及其过表达对细胞增殖、迁移的影响

发布时间：2018-06-11 09:32

  本文选题：neuritin + 基因表达　； 参考：《石河子大学》2007年硕士论文

【摘要】： 目的:(1)检测neuritin在人类部分细胞株中的表达情况,筛选neuritin高表达和低表达细胞株;(2)探讨neuritin过表达对细胞增殖、迁移的影响。 方法:(1)分别采用RT-PCR与免疫组织化学技术在mRNA水平及蛋白水平,检测本实验室现存11种人类正常和肿瘤细胞株中neuritin的表达情况;(2)扩增neuritin ORF,克隆至真核表达载体pcDNA3.1myc/his(-)A中,经转化、筛选、测序鉴定后,抽提并获取高纯度的重组质粒pcDNA3.1(-)A-neuritin,采用脂质体介导转染法将其转染neuritin低表达细胞株,RT-PCR及western-blot鉴定转染效果后,经G418筛选获得稳定表达neuritin的细胞;(3)通过MTT比色和细胞计数分析neuritin过表达对细胞增殖的影响,通过观察细胞形态变化和细胞迁移实验探讨neuritin过表达对细胞迁移的影响。 结果:(1)通过RT-PCR和免疫组织化学检测,筛选出neuritin高表达细胞株293T、hUVEC、hUASMC、Soas-2、LOVO、L-02及低表达细胞株BMSCs、Hela、ECV-304、SK、QGY;(2)构建了neuritin的真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)A-neuritin,经BamHⅠ+EcoRⅠ双酶切鉴定和测序鉴定证实neuritin基因已正确插入多克隆位点;(3)pcDNA3.1(-)A-neutitin转染人骨髓间充质干细胞(BMSCs)后,经G418筛选获得稳定表达neuritin的BMSCs;(4)镜下观察:neuritin过表达使BMSCs形态变得不规则,多伪足,且部分细胞伪足似丝状,更为细长;(5)MTT和细胞计数显示:neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关;(6)细胞迁移实验显示:neuritin过表达对BMSCs的迁移有促进作用。 结论:(1)筛选出neuritin高表达及低表达细胞株,发现neuritin不仅在多种正常细胞中有表达,而且在部分肿瘤细胞中也有表达;(2)构建了pcDNA3.1(-)A-neutitin真核表达系统,并获得稳定表达neuritin的人骨髓间充质干细胞;(3)neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关,可能与细胞增殖无关;(4)neuritin过表达使BMSCs出现伪足的自主性生长,并能促进细胞的迁移;(5)neuritin过表达使部分BMSCs的形态出现类神经元样改变,可能与细胞的分化相关。
[Abstract]:Objective : ( 1 ) To investigate the expression of neurites in human partial cell lines , to screen high - expression and low - expression cell lines of neurites , and ( 2 ) to investigate the effect of overexpression of neurites on cell proliferation and migration .






Methods : ( 1 ) The expression of neurites in 11 human normal and tumor cell lines was detected by RT - PCR and immunohistochemistry .






Results : ( 1 ) The eukaryotic expression recombinant plasmid pcDNA3.1 ( - ) A - neurites was screened by RT - PCR and immunohistochemistry . The eukaryotic expression recombinant plasmid pcDNA3.1 ( - ) A - neurites was constructed .






Conclusion : ( 1 ) The high - expression and low - expression cell lines of neurites were screened . It was found that neurites were not only expressed in a variety of normal cells but also in some tumor cells . ( 2 ) The eukaryotic expression system of pcDNA3.1 ( - ) A - neutitin was constructed .
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R346

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本文编号：2004776