金属蛋白酶抑制剂参与膜型和可溶型凋亡诱导配体TRAIL表达与功能的调节

发布时间：2018-06-17 19:39

  本文选题：金属蛋白酶抑制剂 + 膜型TRAIL　； 参考：《第四军医大学》2005年博士论文

【摘要】：目的 研究蛋白酶抑制剂对膜型TRAIL(Membrane TRAIL,mTRAIL)和可溶型TRAIL(Soluble TRAIL,sTRAIL)表达与功能的调节。方法:(1)采用辛酸法纯化FMU-TRAIL3单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)并用SDS-PAGE鉴定。采用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测mTRAIL的分布;用免疫沉淀及免疫印迹方法鉴定mAb对重组TRAIL(Recombinant TRAIL,rTRAIL)和细胞裂解液中TRAIL分子的识别。应用凋亡检测、~(51)Cr释放实验鉴定FMU-TRAIL3 mAb的中和活性。(2)以不同蛋白酶抑制剂处理Jurkat、Daudi和Colo205细胞,采用间接免疫荧光染色及流式细胞术分析蛋白酶抑制剂对mTRAIL表达的影响。用RT-PCR法分析Jurkat、Daudi和Colo205细胞内ADAM10(Adisintegrin and a metollaprotease, ADAM10)和ADAM17基因的表达。(3)分别用PMA和PHA刺激Jurkat细胞不同时间,有的实验加入金属蛋白酶抑制剂1,10-phenanthroline或ADAM抑制剂TAPI-1(TNF-αprotease inhibitor-1),用间接免疫荧光染色及流式细胞术分析mTRAIL表达;用ELISA检测细胞培养上清中sTRAIL水平。并观察IFN-α和金
[Abstract]:Objective to investigate the regulation of protease inhibitor on the expression and function of membrane TRAILMembrane trail and soluble TRAILLE Soluble TRAILSTRAIL. Methods FMU-TRAIL3 monoclonal antibody (FMU-TRAIL3) was purified by octanoic acid method and identified by SDS-PAGE. The distribution of mTRAIL was detected by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry, and the recognition of recombinant trail Recombinant trail rTRAIL and trail in cell lysate was identified by immunoprecipitation and immunoblotting methods. The neutralization activity of FMU-TRAIL3 mAb was assayed by apoptosis assay. The neutralization activity of FMU-TRAIL3 mAb was assayed with different protease inhibitors. Jurkatron Daudi and Colo205 cells were treated with different protease inhibitors. The effects of protease inhibitors on the expression of mTRAIL were analyzed by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry. The expression of ADAM10Adisintegrin and a metollaprotease, (ADAM10) and ADAM17 gene in Jurkatine Daudi and Colo205 cells were analyzed by RT-PCR. The expression of ADAM17 gene in Jurkat cells was stimulated by PMA and PHA at different time points, respectively. In some experiments, the expression of mTRAIL was detected by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry, and the level of sTRAIL in the supernatant of cell culture was detected by Elisa, and the expression of mTRAIL was detected by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry, by adding metalloproteinase inhibitor 1-phenanthroline or Adam inhibitor TAPI-1TNF- 伪 protease inhibitor. IFN- 伪 and gold were observed.
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

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本文编号：2032225