酵母双杂交技术筛选与SOX4相互作用的蛋白质及其功能研究

发布时间：2018-06-19 08:45

  本文选题：SOX4 + Ubc9　； 参考：《中国人民解放军军事医学科学院》2005年硕士论文

【摘要】：SOX4是SOX[SRY(Sex-related region Y)-box]转录因子家族重要成员,在胚胎发育过程中起关键的调控作用。SOX4选择性表达于动物卵巢,睾丸,胸腺以及T,前B淋巴细胞中。近年来越来越多的研究表明,SOX4在许多肿瘤组织中高表达,包括乳腺癌、结肠癌、肺癌、成髓细胞瘤以及肝癌等,提示SOX4可能与肿瘤形成有关。另有研究显示,SOX4在前列腺素诱导的肝细胞凋亡中表达增加,提示它可能参与了凋亡调控。SOX4参与了许多生理及病理过程的调控,但它发挥作用的机制尚不清楚。为了进一步揭示SOX4重要的生物学功能,特别是它在细胞凋亡中发挥的重要作用,我们应用酵母双杂交筛选技术对SOX4相互作用蛋白质进行了筛选并对其功能进行了初步研究。 我们分别以人SOX4的两个片断SOX4(aa1-133)和SOX4(aa130-380)分别作为诱饵,从人乳腺文库中筛选与其相互作用的蛋白质。通过四缺培养板的初步筛选,我们从总共4.11x10~6个文库质粒中得到184个候选克隆可能与SOX4存在相互作用,随后经过蓝白斑继续筛选,剩下138个候选克隆。提取138个文库质粒后再分别与诱饵质粒共转酵母细胞后再通过四缺培养板和蓝白斑筛选,最终我们得到4个阳性克隆。测序结果表明,这4个克隆为同一基因来源:Ubc9(Ubiquitin-conjugating enzyme 9)。Ubc9蛋白全长158个氨基酸,从酵母到人进化高度保守,是泛素连接E2酶(Ubiquitin-Conjugating Enzyme)家族重要成员。我们从人乳腺文库中钓取了其cDNA序列,为下一步的结构和功能研究做好准备。SOX4与Ubc9之间的相互作用随后通过体
[Abstract]:SOX4 plays a key role in the development of tumor . SOX4 is highly expressed in many tumor tissues , including breast cancer , colon cancer , lung cancer , myelocytoma and liver cancer .








A total of 184 candidate clones were isolated from a total of 4 . 11 10 - 6 library plasmids with SOX4 ( aa1 - 133 ) and SOX4 ( aa130 - 380 ) , respectively . The total length of Ubc9 protein is 158 amino acids and is highly conserved from yeast to human evolution . It is an important member of ubiquitin - linked E2 enzyme family .
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：Q789

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本文编号：2039304