增殖诱导配体（APRIL）与人类γδT细胞的功能相关性研究

发布时间：2018-06-19 12:59

  本文选题：增殖 + 诱导　； 参考：《中国协和医科大学》2006年硕士论文

【摘要】：γδT细胞兼具特异性和非特异性免疫应答双重特征，它在机体免疫应答中的生物学意义与功能有待于进一步阐明。 增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand，APRIL)，属于TNF超家族。Ⅱ型跨膜蛋白，全长250个氨基酸。研究表明，APRIL除了可促进肿瘤的形成和肿瘤细胞的增殖和存活外，亦在免疫应答中发挥作用。外源性APRIL分子可促进初始B细胞和αβT细胞的增殖及αβT细胞的存活，并能提高外周血B细胞分泌IgM的能力。然而，有关APRIL与γδT细胞的关系尚未见系统报道。本论文旨在初步探讨APRIL与人类γδT细胞的功能相关性，研究APRIL和其相应受体BCMA和TACI在γδT细胞中的表达情况，，以及对γδT细胞增殖的影响，以期为阐明APRIL的生物学意义及γδT细胞的功能研究提供资料。 本论文包括两个部分。在第一部分中，我们利用人外周血单个核细胞的反转录产物模板，克隆了APRIL的全长cDNA，并通过His融合表达载体，将APRIL基因重组到原核表达载体pET30a的EcoRI和HindⅢ位点之间。阳性的重组子在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达。诱导后的蛋白以包涵体的形式出现。复性纯化后的的融合蛋白保持了原有的免疫原性，并免疫小鼠制备单克隆抗体。通过Western印迹分析证明该单克隆抗体具有较好的免疫学活性，可以直接用于免疫印迹和ELISA检测。APRIL单克隆抗体的制备为后续的研究奠定了基础。 在第二部分中，我们首先利用固相扩增的方法从人外周血中扩增出Vγ9／Vδ2γδT细胞。采用RT-PCR技术分析了APRIL及其特异性受体BCMA和TACI在表达状况。Western印迹对γδT细胞总蛋白提取物和膜蛋白提取物进行了分析。并利用激光共聚焦扫描显微镜技术对APRIL在Vγ9／Vδ2γδT细胞膜表面的表达情况进行了检测。最后，利用体外增殖实验，探讨APRIL分子是否对Vγ9／Vδ2γδT细胞具有直接刺激作用。研究结果显示，Vγ9／Vδ2γδT细胞可以以分泌型蛋白的形式表达APRIL，而不表达APRIL的受体BCMA和TACI。[3H]TdR掺入实验证实了APRIL可以直接刺激γδT细胞发生增殖。上述结果提示APRIL分子可
[Abstract]:The biological significance and function of 纬 未 T cells in immune response should be further elucidated. The proliferation-inducing ligand, a proliferation-inducing ligand, belongs to the TNF- superfamily. Type 鈪

本文编号：2039971