维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导mICAM-1表达的调节

发布时间：2018-06-20 07:38

  本文选题：肺炎支原体 + 膜脂蛋白　； 参考：《武汉大学》2005年硕士论文

【摘要】：目的 用Triton X-114 提取肺炎支原体的膜脂蛋白(Mp-LAMP),观察Mp-LAMP对ECV304细胞膜表面细胞间粘附分子1(mICAM-1)表达的影响,并初步探讨膜脂蛋白中的活性成分;观察抗氧化剂维生素C对Mp-LAMP诱导ECV304细胞、A549细胞表达mICAM-1的影响,为阐明肺炎支原体感染所致炎性反应奠定基础,并探讨维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导的炎症反应的抑制作用。 方法 本实验主要分为两个阶段:第一阶段提取肺炎支原体膜脂蛋白,并用提取的膜脂蛋白刺激脐静脉血管内皮细胞系ECV304细胞。采用流式细胞法检测不同Mp-LAMP浓度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)及不同作用时间(0h、4h、8h、16h、24h、32h)对ECV304细胞表达mICAM-1水平的影响;用蛋白酶K(0.2μg/ml)及脂蛋白脂肪酶(0.2μg/ml)处理Mp-LAMP,以观察两种酶对膜脂蛋白诱导的mICAM-1表达水平的影响。第二阶段用流式细胞术检测不同浓度维生素C(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)对Mp-LAMP诱导ECV304细胞及肺上皮细胞系A549细胞表达mICAM-1水平的影响。 结果 与基础表达水平相比,ECV304细胞受到Mp-LAMP作用后,mICAM-1的表达水平明显上调(P0.01),且对Mp-LAMP具有浓度依赖性,但当Mp-LAMP的刺激浓度超过25μg/ml后,mICAM-1的表达水平不再升高。随着Mp-LAMP作用时间的延长,ECV304细胞mICAM-1表达水平逐渐上升,16—24h之间达到高峰,然后开始下降;经蛋白酶K消化后的Mp-LAMP仍然可以诱导ECV304细胞mICAM-1表达水平的上调,与Mp-LAMP对照组相比无显著性差异(P0.05);而经脂蛋白脂肪酶消化的Mp-LAMP诱导ECV304细胞表达mICAM-1的能力与对照相比则明显下降(P0.01);与对照组相比,不同浓度的维生素C对膜脂蛋白刺激A549细胞表达mICAM-1的水平无显著性差异(P0.05),但对膜脂蛋白刺激ECV304细胞表达mICAM-1具有抑制作用(P0.05),维生素C浓度越高,抑制作
[Abstract]:Objective to study the effect of Mp-LAMP on the expression of intercellular adhesion molecule (1mICAM-1) on the surface of ECV304 cell membrane, and to explore the active components of membrane lipoprotein (MMP) in mycoplasma pneumoniae extracted from Mycoplasma pneumoniae by Triton X-114, and to investigate the effect of Mp-LAMP on the expression of ICAM-1 on ECV304 cell membrane. To observe the effect of vitamin C on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by Mp-LAMP, and to lay a foundation for elucidating the inflammatory response induced by mycoplasma pneumoniae infection. To investigate the inhibitory effect of vitamin C on the inflammatory response induced by mycoplasma pneumoniae membrane lipoprotein. Methods the experiment was divided into two stages: in the first stage, mycoplasma pneumoniae membrane lipoprotein was extracted, and the ECV304 cell line was stimulated by the extracted membrane lipoprotein. The expression of mICAM-1 in ECV304 cells was detected by flow cytometry with different Mp-LAMP concentrations of 0 渭 g / ml (5 渭 g / ml) and 10 渭 g / ml / ml (15 渭 g / ml) and 20 渭 g / 20 渭 g / ml ~ (20 渭 g / ml), respectively, and the effect of two enzymes on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by lipoprotein membrane was observed by observing the effects of two kinds of enzymes on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by lipoprotein membrane at 8 h, 8 h, 16 h, 24 h and 32 h), and treated with protease K (0.2 渭 g / ml) and lipoprotein lipase (0.2 渭 g / ml) to observe the effects of the two enzymes on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells induced by lipoprotein membrane. In the second stage, flow cytometry was used to detect the effect of different concentrations of vitamin C 0 渭 mol / L ~ (25 渭 mol / L) ~ (50 渭 mol / L ~ (-1) ~ (100 渭 mol / L ~ (-1) on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells and lung epithelial cell line A549 induced by Mp-LAMP. Results compared with the basic expression level, the expression of mICAM-1 in ECV304 cells was significantly up-regulated by Mp-LAMP and was concentration-dependent on Mp-LAMP, but the expression level of mICAM-1 in ECV304 cells did not increase when the stimulation concentration of Mp-LAMP exceeded 25 渭 g/ml. The expression of mICAM-1 in ECV304 cells increased gradually with the prolongation of Mp-LAMP and reached its peak between 16-24 hours and then decreased, and the expression level of mICAM-1 in ECV304 cells was still up-regulated by Mp-LAMP after digestion with protease K, and the expression of mICAM-1 was up-regulated in ECV304 cells. There was no significant difference between Mp-LAMP and Mp-LAMP, but the ability of Mp-LAMP digested by lipoprotein lipase to induce mICAM-1 expression in ECV304 cells was significantly lower than that in control group (P 0.01). There was no significant difference in the expression of mICAM-1 in A549 cells stimulated by membrane lipoprotein at different concentrations of vitamin C, but it had an inhibitory effect on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells stimulated by membrane lipoprotein. The higher the concentration of vitamin C was, the more inhibitory effect was on the expression of mICAM-1 in ECV304 cells.
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R375

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本文编号：2043506