幽门螺杆菌重组NapA蛋黄抗体的制备和体内外研究

发布时间：2018-06-21 13:00

  本文选题：幽门螺杆菌 + 中性粒细胞激活蛋白　； 参考：《重庆医科大学》2006年硕士论文

【摘要】： 第一部分:幽门螺杆菌NapA-CtxB融合蛋白的基因克隆与表达 目的:采用基因工程技术克隆、表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒细胞激活蛋白NapA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因NapA-ctxB,为研制H.pylori疫苗提供有效抗原,为探讨NapA致病机理、制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。 方法:用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-NapA质粒的NapA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE-nctB,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB;Western blot分析其抗原性。结果:经测序HCTB融合基因片段由807bp组成,编码269个氨基酸残基的多肽。经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为30 000。可溶性表达占全菌的27%以上,经亲和层析后可获得纯度为94%以上的重组蛋白。Western blot分析显示能分别与NpaA抗血清和CT抗血清反应。 结论:NapA和ctxB融合基因原核表达质粒构建成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。 第二部分:幽门螺杆菌重组NapA-IgY和NapA-CtxB-IgY的制备 目的:以重组幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(NapA)和NapA-CtxB为抗原,制备高效价的抗NapA蛋黄抗体(IgY)和抗NCTB蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌治疗、预防性抗体奠定基础。方法:以制备的重组蛋白免疫鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY。ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化。将效价高的NapA-IgY
[Abstract]:The first part: cloning and expression of the fusion protein of Helicobacter pylori NapA-CtxB objective: to clone the fusion protein of Helicobacter pylori NapA-CtxB by genetic engineering technique. To express the fusion gene NapA-ctxB of Helicobacter pylori Helicobacter pylori (Helicobacter pylori) neutrophil activating protein NapA and cholera toxin B subunit ctxB, to provide an effective antigen for the development of H. pylori vaccine, to explore the pathogenesis of NapA and to prepare a vaccine to prevent H. pylori infection. Methods: the ctxB gene fragment was amplified by PCR and cloned into the upstream of Napa gene of pQE30-NapA plasmid. The expression plasmid pQE-nctB containing two genes was constructed and transformed into E. coli DH5 伪. Its antigenicity was analyzed by blot induced by IPTG. Results: the fusion gene was composed of 807bp and encoded 269 amino acid residues. SDS-PAGE analysis showed that the relative molecular weight was about 30 000. The recombinant protein with purity of more than 94% was obtained by affinity chromatography. Western blot analysis showed that the recombinant protein could react with NpaA antiserum and CT antiserum respectively. Conclusion the prokaryotic expression plasmid of the fusion gene of the two fusion genes was successfully constructed and highly expressed in Escherichia coli DH5 伪. The second part: preparation of recombinant NapA-IGY and NapA-CtxB-IGY of Helicobacter pylori objective: to use the recombinant Helicobacter pylori neutrophil activator protein NapA and NapA-CtxB as antigens. The preparation of high titer anti-NapA yolk antibody (IgY) and anti-NCTB yolk antibody (IgYY) laid the foundation for the development of Helicobacter pylori treatment and prophylactic antibody. Methods: the chicken was immunized with recombinant protein. The time-titer of antibody was determined by using the method of water dilution and chloroform organic precipitation to extract IgY. Elisa. NapA-IGY with high tite
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

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本文编号：2048717