甘氨酸受体在ATP耗竭细胞保护中的作用及机制研究

发布时间：2018-06-22 12:43

  本文选题：甘氨酸受体 + ATP耗竭　； 参考：《南京医科大学》2005年博士论文

【摘要】：目的: 明确细胞ATP耗竭时,甘氨酸对细胞的保护作用是否由甘氨酸受体(glycine receptor, GlyR)所介导;观察细胞在ATP耗竭-“复能”过程中,其代谢、增殖活性变化的特点。为进一步揭示甘氨酸保护作用机制提供研究基础和新的思路。 方法: GlyR的配基对ATP耗竭细胞的保护作用。构建甘氨酸受体α1亚单位(GlyRα1)的真核表达载体pcDNA3.1(b),采用脂质体法(LipofectAMINETM 2000)将其与pEGFP-C1质粒共转染入缺乏天然GlyR的人胚胎肾细胞株(Human Embryonic Kidney 293,HEK 293)内,流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测细胞转染率,分别以RT-PCR及Western blot检测GlyRα1的mRNA转录及蛋白表达。野生型及转染GlyR的HEK293细胞处于ATP耗竭状态,观察甘氨酸、士的宁对细胞的保护作用。犬肾细胞MDCK(Madin-Darby Canine Kidney)作为对照细胞。光学显微镜及电镜观察细胞形态及超微结构改变。通过检测细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放率、细胞膜对不同分子量标记复合物(分子量668Da的碘化丙啶、3kDa及70kDa右旋糖苷)通透性反映细胞膜完整性。通过台盼蓝染色观察细胞活性。
[Abstract]:Aim: to investigate whether the protection of glycine against ATP depletion is mediated by the glycine receptor (glycine receptor, GlyR, and to observe the role of glycine in the process of ATP-depletion. Its metabolism, proliferative activity change characteristic. In order to further reveal the protective mechanism of glycine to provide a basis for further research and new ideas. Methods: the protective effect of GlyR ligand on ATP depletion cells was studied. The eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (b), of glycine receptor 伪 1 subunit (GlyR 伪 1) was constructed and co-transfected with pEGFP-C1 plasmid into human embryonic kidney cell line (Human Embryonic Kidney 293) with liposome assay (LipofectAmNETM 2000). The transfection rate of GlyR 伪 1 was detected by laser confocal microscopy, and the mRNA transcription and protein expression of GlyR 伪 1 were detected by RT-PCR and Western blot, respectively. Wild type and GlyR transfected HEK293 cells were in ATP depletion state. The protective effects of glycine and strychnine on the cells were observed. MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) was used as control cell. The changes of cell morphology and ultrastructure were observed by optical microscope and electron microscope. The release rate of lactate dehydrogenase (LDH) was measured. The permeability of cell membrane to different molecular weight marker complexes (668Da, 3kDa and 70kDa dextran) reflected the integrity of cell membrane. Cell activity was observed by trypan blue staining.
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R363

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 宋苏沛;廖艺聪;王雷;宗丹;戴体俊;;士的宁对丙泊酚、氯胺酮和依托咪酯催眠作用的影响[J];航空航天医学杂志;2011年07期

2 ;[J];;年期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相关会议论文 前10条

1 许晓利;刘宇炜;;甘氨酸受体介导的对大鼠内侧额叶前皮质三、四层神经元的抑制作用[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

2 徐天乐;李艳芳;;H~+对大鼠脊髓甘氨酸受体以及甘氨酸能突触电流的调控[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年

3 吕辉;徐天乐;;全麻药对甘氨酸受体的调控及其机制研究[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年

4 李耕林;陆欣华;杨雄里;;鲫鱼视网膜分离神经节细胞的γ-氨基丁酸和甘氨酸受体[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

5 许丽娅;杜久林;杨雄里;;牛蛙视网膜M，

本文编号：2052872