淋病奈瑟菌NspA基因疫苗的实验研究

发布时间：2018-06-29 17:44

  本文选题：淋病奈瑟菌 + NspA　； 参考：《扬州大学》2006年硕士论文

【摘要】： 淋病奈瑟菌是淋病的致病菌。目前,淋病奈瑟菌的耐药性日趋增强,给淋病治疗带来了困难;已找到的一些淋病奈瑟菌候选疫苗,如Por、Pil、Opa、Los等,都存在不同程度的抗原变异,使淋病疫苗研究产生了障碍,因此人们一直在寻找具有免疫保护性的保守抗原。1999年Plante等首先克隆了淋病奈瑟菌的表面蛋白A(Neisseria surface Protein A, NspA)基因,发现NspA在细胞表面持续表达,保守性高,具有较强的免疫原性,是一个很好的疫苗候选者。本研究着重探讨利用NspA真核表达基因构件制备淋病基因疫苗,并试图利用雌激素建立淋病奈瑟菌小鼠感染模型。 一、淋病奈瑟菌NspA基因的克隆与真核细胞表达 根据淋病奈瑟菌NspA的基因序列设计一对引物,以淋病奈瑟菌WHO-A株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得具有完整开放读码框(ORF)的NspA抗原基因,将纯化后的PCR产物与线性化质粒pCMVScript连接,转化大肠杆菌DH5α菌株。重组质粒经酶切鉴定和序列分析,证实所克隆的NspA基因阅读框架正确,将NspA基因正向插入真核表达载体pCMVScript的重组质粒命名为pcNspA。以脂质体包裹重组质粒pcNspA转染COS-7细胞,用间接免疫荧光检测,表明转染pcNspA重组质粒的COS-7细胞能瞬时表达NspA抗原。 二、小鼠体内NspA基因疫苗诱生特异性抗体研究 为进一步研究NspA基因疫苗的免疫保护性,我们将NspA真核细胞表达载体通过三种接种途径(肌肉注射、滴鼻免疫、阴道接种)免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,分别收集小鼠的血清、支气管肺泡洗液、阴道洗液,用间接ELISA方法检
[Abstract]:Neisseria gonorrhoeae is the pathogen of gonorrhea. At present, the drug resistance of Neisseria gonorrhoeae is increasing, which makes it difficult to treat gonorrhea. Some candidate vaccines of Neisseria gonorrhoeae, such as Poro Pila Opa-Los, have different degree of antigen variation, which makes the research of gonorrhea vaccine difficult. In 1999, Plante et al first cloned Neisseria surface protein A (NspA) gene from Neisseria gonorrhoeae, and found that NspA was expressed continuously on the cell surface, with high conservation and strong immunogenicity. Is a good vaccine candidate. This study focused on the preparation of gonorrhea gene vaccine using NspA eukaryotic expression gene component, and attempted to use estrogen to establish an infection model of Neisseria gonorrhoeae in mice. First, the cloning of NspA gene from Neisseria gonorrhoeae and the expression of NspA gene in eukaryotic cells were used to design a pair of primers according to the sequence of NspA gene of Neisseria gonorrhoeae. The genomic DNA of Neisseria gonorrhoeae strain WHO-A was used as template. NspA antigen gene with complete open reading frame (ORF) was obtained by PCR amplification. The purified PCR product was ligated with linearized plasmid pCMVScript and transformed into Escherichia coli DH5 伪 strain. The reading frame of the cloned NspA gene was confirmed by restriction endonuclease digestion and sequence analysis. The recombinant plasmid which was inserted into eukaryotic expression vector pCMVScript was named pcNspA. COS-7 cells were transfected with liposome encapsulated recombinant plasmid pcNspA. Indirect immunofluorescence assay showed that COS-7 cells transfected with pcNspA recombinant plasmid could express NspA antigen instantaneously. Second, in order to further study the immune protection of NspA gene vaccine in mice, the specific antibody was induced by NspA gene vaccine in mice. We immunized 6-week-old female BALB / c mice with NspA eukaryotic expression vector by three inoculation routes (intramuscular injection, nasal drip immunization, vaginal inoculation). Serum, bronchoalveolar lavage fluid and vaginal lavage fluid were collected from the mice respectively and detected by indirect Elisa.
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392;Q789

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本文编号：2082881