抗人肝癌相关抗原SMP-30抗体的制备及其免疫组化的研究

发布时间：2018-07-01 12:05

  本文选题：肝癌 + SMP-30　； 参考：《广西医科大学》2006年硕士论文

【摘要】： 目的:通过表达人肝癌肿瘤相关抗原SMP-30羧基端165个氨基酸的MBP-SMP-30融合蛋白,免疫兔子制备出抗MBP-SMP-30多克隆抗体,使用免疫组织化学方法检测人肝细胞癌(HCC)中SMP-30的蛋白表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。 方法:(1)将本课题组构建的含SMP-30羧基末端165个氨基酸的DNA序列的表达质粒,经原核表达和亲和层析纯化获得的目的蛋白MBP-SMP-30免疫兔子,制备抗MBP-SMP-30多克隆抗体,并经ELISA和Western blot鉴定其免疫活性。(2)制备48例人HCC及相应的癌旁组织、6例正常人肝组织和1例正常人肾组织的石蜡切片。采用免疫组织化学SABC法,检测SMP-30在上述组织中的表达情况,结合临床资料进行统计分析。 结果:(1)经ELISA和Western blot鉴定,抗MBP-SMP-30多克隆抗体可以和MBP-SMP-30特异性结合。(2)SMP-30定位于肝细胞和肾小管上皮细胞的胞浆和胞核。(3)HCC癌旁组织的SMP-30蛋白表达高于HCC组织,具有显著性差异(P0.05)。(4)SMP-30蛋白表达与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、伴肝硬化情况、HBsAg和AFP检测情况未见有相关性(P0.05)。 结论:(1)使用MBP-SMP-30融合蛋白制备的多克隆抗体可成功检测到人肝组织和肾组织中的SMP-30。(2)SMP-30与HCC的发生、发展有关。(3)SMP-30过度表达可能是HCC的早期性、保护性事件。
[Abstract]:Objective: to prepare anti-MBP-SMP-30 polyclonal antibody by expressing 165-amino acid MBP-SMP-30 fusion protein with carboxyl terminal of human hepatocellular carcinoma antigen SMP-30, and to detect the expression of SMP-30 protein in human hepatocellular carcinoma (HCC) by immunohistochemical method. To explore its role in the occurrence and development of HCC and its clinical significance. Methods: (1) the recombinant plasmid containing 165 amino acids at the carboxyl terminal of SMP-30 was constructed and purified by prokaryotic expression and affinity chromatography. The target protein MBP-SMP-30 was immunized with rabbit to prepare anti-MBP-SMP-30 polyclonal antibody. The immunological activity was determined by Elisa and Western blot. (2) paraffin sections were prepared from 48 human HCC and 6 normal human liver tissues and 1 normal human kidney tissue. Immunohistochemical SABC method was used to detect the expression of SMP-30 in the above tissues. Results: (1) the anti-MBP-SMP-30 polyclonal antibody could specifically bind to MBP-SMP-30 by Elisa and Western blot. (2) SMP-30 was localized in the cytoplasm and nucleus of hepatocytes and renal tubular epithelial cells. (3) the expression of SMP-30 protein in HCC adjacent tissues was higher than that in HCC tissues. There was no significant correlation between the expression of SMP-30 protein and sex, age, tumor size, pathological grade and liver cirrhosis (P0.05). Conclusion: (1) the polyclonal antibody prepared by MBP-SMP-30 fusion protein can successfully detect SMP-30in human liver and kidney tissues. (2) SMP-30 is related to the occurrence and development of HCC. (3) the overexpression of SMP-30 may be the early and protective event of HCC.
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R735.7;R392

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本文编号：2087725