神经节苷脂GD1a在无血清条件下诱导FBJ细胞凋亡

发布时间：2018-07-04 08:44

  本文选题：神经节苷脂GD1a + FBJ骨肉瘤细胞　； 参考：《沈阳药科大学》2007年硕士论文

【摘要】： 神经节苷脂(Gangliosides)是一类含唾液酸的鞘糖脂，存在于细胞膜的外表面。在胚胎形成、细胞分化、细胞增殖、转化和细胞转移等生理现象中发挥着重要作用。本文阐述了神经节苷脂GD1a的一种新的功能即诱导FBJ病毒感染的小鼠骨肉瘤细胞产生凋亡。在无血清培养条件下，富含GD1a的FBJ-S1细胞趋向死亡，而缺乏GD1a的FBJ-LL细胞却却未见明显影响。通过流式细胞仪对细胞进行膜联蛋白V异硫氰酸荧光素(FITC-AnnexinV)和碘化丙啶(PI)双染检测和细胞周期分析发现FBJ-S1细胞在无血清条件下趋向死亡是因凋亡而引起的。因此，我们推测GD1a可诱导FBJ细胞凋亡。为了验证这一推论，外源性GD1a在无血清培养条件下处理FBJ-LL细胞，发现FBJ-LL细胞出现死亡。FBJ-S1细胞通过加入葡萄糖苷神经酰胺合成酶抑制剂(D-PDMP)处理和转染入唾液酸转移酶(st3ga15)的siRNA的来抑制GD1a的合成，发现在无血清条件下经D-PDMP处理后FBJ-S1细胞抵抗死亡，且转染siRNA到FBJ-S1细胞后得到的单克隆细胞也同样抵抗死亡。另外，很多文章报道神经酰胺和神经节苷脂GD3可诱导凋亡，但在发生凋亡的FBJ细胞中神经酰胺的表达含量并没有变化，而GD3并未见在FBJ细胞中表达，这说明神经酰胺和GD3不是引起FBJ细胞凋亡的因素。 窖蛋白1(caveolin-1，亦译为小窝蛋白1)是一种肿瘤抑制蛋白。本文研究发现，窖蛋白1参与了GD1a诱导的FBJ细胞凋亡并起着关键作用。FBJ-S1细胞在无血清条件下趋向死亡，而FBJ-LL细胞并未出现此现象，逆转录PCR法检测发现FBJ-S1细胞中窖蛋白1的表达量是FBJ-LL细胞的5倍。FBJ-LL细胞在外源性GD1a处理后促进其趋向死亡，免疫印迹法(Western blot)发现窖蛋白1的表达量也明显增加。另外，利用siRNA技术沉降FBJ-S1细胞中窖蛋白1的表达量，无血清培养条件下，结果使其存活。数据表明窖蛋白1可促进FBJ细胞的凋亡。存活蛋白(survivin，亦译为生存蛋白或生存素)是一种凋亡抑制蛋白，研究发现窖蛋白1可以调节存活蛋白，且存活蛋白也参与了GD1a诱导的FBJ细胞凋亡。生长因子。因此我们随机检测了FBJ-LL和FBJ-S1细胞中一些生长因子的mRNA水平表达，发现FBJ-LL细胞中生长因子如PDGFα，，TNFα和VEGFβ的表达量是FBJ-S1细胞中的数倍，且FBJ-S1细胞在无血清培养基中加入PDGFα或TNFα培养后使其存活。数据表明内源性GDla可调节生长因子的表达同时也可诱导凋亡。另外，通过信号传导抑制剂和细胞内吞抑制剂来研究GDla诱导FBJ细胞凋亡的机制，发现p38MAPK途径和细胞内吞途径对GDla诱导的细胞凋亡发挥着重要作用。
[Abstract]:Gangliosides (Gangliosides) are a kind of sphingolipids containing sialic acid, which exist on the outer surface of cell membrane. It plays an important role in embryogenesis, cell differentiation, cell proliferation, transformation and cell metastasis. This paper describes a new function of ganglioside GD1a which induces apoptosis of mouse osteosarcoma cells infected with FBJ virus. In serum-free culture, FBJ-S1 cells rich in GD1a tended to die, but FBJ-LL cells lacking GD1a had no obvious effect. FITC-Annexin V (FITC-Annexin V) and Pi (Pi) double staining and cell cycle analysis showed that FBJ-S1 cell death in serum-free condition was caused by apoptosis. Therefore, we speculate that GD1a can induce apoptosis of FBJ cells. In order to verify this inference, FBJ-LL cells were treated with exogenous GD1a in serum-free culture. It was found that FBJ-LL cells died. FBJ-S1 cells inhibited the synthesis of GD1a by adding glucoside ceramide synthase inhibitor (D-PDMP) and siRNA transfected into sialic acid transferase (st3ga15). The monoclonal cells transfected with siRNA into FBJ-S1 cells were also resistant to death. In addition, it has been reported that ceramide and ganglioside GD3 can induce apoptosis, but there is no change in ceramide expression in FBJ cells, but GD3 is not expressed in FBJ cells. This suggests that ceramide and GD 3 are not the factors that induce apoptosis of FBJ cells. Caveolin-1 is a tumor suppressor protein. In this study, we found that cellar protein 1 participated in the apoptosis of FBJ cells induced by GD1a and played a key role. FBJ-S1 cells tended to die in serum-free condition, but FBJ-LL cells did not. The expression of cellar protein 1 in FBJ-S1 cells was 5 times higher than that in FBJ-LL cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction. FBJ-LL cells increased to death after treatment with exogenous GD1a. Western blot showed that the expression of cellar protein 1 was also significantly increased. In addition, the expression of cellar protein 1 in FBJ-S1 cells was deposited by siRNA technique and survived in serum-free culture. The data showed that cellar protein 1 could promote the apoptosis of FBJ cells. Survival protein (survivin) is an inhibitor of apoptosis. It has been found that cellar protein 1 can regulate survival protein, and survivin also participates in GD1a induced apoptosis of FBJ cells. Growth factor. Therefore, we randomly detected the mRNA expression of some growth factors in FBJ-LL and FBJ-S1 cells, and found that the expression of growth factors such as PDGF 伪 TNF- 伪 and VEGF 尾 in FBJ-LL cells was several times higher than that in FBJ-S1 cells. Moreover, FBJ-S1 cells were cultured in serum-free medium with PDGF 伪 or TNF 伪. The data showed that endogenous GDla could regulate the expression of growth factor and induce apoptosis. In addition, signal transduction inhibitors and endocytosis inhibitors were used to study the mechanism of GDla induced apoptosis in FBJ cells. It was found that p38 MAPK pathway and intracellular endocytosis pathway play an important role in GDla induced apoptosis.
【学位授予单位】：沈阳药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R341

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本文编号：2095496