ERK信号对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2018-07-06 09:43

  本文选题：HaCaT + EGF　； 参考：《暨南大学》2006年硕士论文

【摘要】：目的： 探讨ERK信号在HaCaT细胞增殖及凋亡中的作用。 方法： 1．HaCaT细胞和HEK293细胞的培养：培养基为含有10％FBS的DMEM培养基，培养于37℃、5％CO_2恒温饱和湿度培养箱。细胞80～90％融合时，0.25％胰蛋白酶消化，37℃孵育5min，加入2mL完全培养基，吹打成单个细胞，以1：3的比例接种，通常3～4天即可传代。实验时细胞接种密度为5×10~4cells／mL。 2．细胞的处理： 1) 增殖模型的建立：培养板细胞达到70～80％融合时，加入EGF(终浓度分别为1、10和100μg／L)，继续培养24h。MEK特异性阻断剂PD98059(6.25、12.5、25、50和100μM)在EGF加入前5h加入。 2) 凋亡模型的建立：细胞融合至80％以上时，PBS洗2次后每孔加入PBS 1mL，将细胞放置于紫外灯管下照射(低剂量组照射强度为UVA2J／cm~2、UVB10mJ／cm~2；高剂量组为UVA6J／cm~2、UVB 30mJ／cm~2)，对照组不照射。 3．增殖的检测方法：在培养结束前每孔加入37kBq的~3H-TdR，继续培养6h。 参照Wallac提供的操作程序检测~3H-TdR的掺入量，结果以Counts／min(CPM)表示。
[Abstract]:Objective: to investigate the role of ERK signal in the proliferation and apoptosis of HaCaT cells. Methods: 1. Culture of HaCaT cells and HEK293 cells: DMEM medium containing 10 FBS was cultured in 37 鈩，

本文编号：2102375