生殖支原体LAMPs诱导THP-1细胞产生前炎症性细胞因子的信号转导通路

发布时间：2018-07-12 14:55

  本文选题：生殖支原体 + 脂质相关膜蛋白　； 参考：《南华大学》2007年硕士论文

【摘要】： 目的: 本研究试图探讨生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)能否诱导人单核细胞系THP-1产生前炎症细胞因子(CKs)TNF-α,IL-1β和IL-6;以及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、核转录因子κB(NF-κB)和激活蛋白-1 (AP-1)的激活情况;并研究LAMPs诱导产生CKs是否与这些信号转导通路的激活有关。 方法: 培养Mg标准株G37并提取其LAMPs。用所提取的LAMPs刺激THP-1细胞,ELISA双抗体夹心法检测其对前炎症细胞因子TNF-α,IL-1β和IL-6的诱生情况;同时通过Western blot检测其对应激活化蛋白激酶/ c-Jun氨基端激酶(SAPK/JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38磷酸化的影响;并用凝胶迁移滞后实验(EMSA)分析LAMPs对THP-1细胞NF-κB和AP-1 DNA结合活性的改变情况;随后将THP-1细胞分别与不同浓度的SAPK/JNK抑制剂SP600125、ERK1/2特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB203580或NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)孵育30min,再加入3μg/ml LAMPs刺激24h,ELISA分析其对LAMPs所诱导产生CKs的影响。 结果: ⑴不同浓度的LAMP(s0.5μg/ml～3μg/ml)能明显诱导THP-1细胞产生TNF-α,IL-1β和IL-6,且CKs的产生与LAMPs呈明显的剂量依赖性;当LAMPs浓度高于3μg/ml时,TNF-α,IL-1β和IL-6产生的量明显减少。 ⑵LAMPs刺激THP-1细胞15min后,Western blot能检测到明显的磷酸化的SAPK/JNK1/2、p38和ERK1/2条带,30min后达到高峰,随后逐渐下降,持续时间达60min以上;而细胞总SAPK/JNK1/2和p38的量(包括磷酸化和非磷酸化的量)在不同时间段几乎保持恒定;同时LAMPs也能增强NF-κB和AP-1 DNA结合活性,其峰值位于刺激后2h。 ⑶PD98059能以剂量依赖性方式抑制LAMPs诱导的TNF-α和IL-β产生,但不能抑制IL-6; SP600125能部分抑制IL-6产生,但对TNF-α和IL-β的产生无明显影响;而SB203580和PDTC能抑制TNF-α,IL-1β和IL-6这三种CKs的产生。 结论: ⑴Mg LAMPs能诱导THP-1产生TNF-α,IL-1β和IL-6; ⑵LAMPs能激活THP-1细胞MAPKs,NF-κB和AP-1; ⑶LAMPs诱导THP-1细胞产生CKs与其MAPKs、NF-κB的激活有关。
[Abstract]:Objective: this study was to investigate whether the lipid associated membrane proteins (lamps) of Mycoplasma genitalium (mg) can induce the production of proinflammatory cytokines (CKs) TNF- 伪, IL-1 尾 and IL-6 in human monocyte cell line THP-1, as well as the expression of mitogen-activated eggs. Activation of white kinase (MAPKs), nuclear transcription factor 魏 B (NF- 魏 B) and activator protein 1 (AP-1); To investigate whether the production of CKs induced by lamps is related to the activation of these signal transduction pathways. Methods: mg standard strain G37 was cultured and its lamps were extracted. The induction of proinflammatory cytokines TNF- 伪, IL-1 尾 and IL-6 in THP-1 cells was detected by Elisa double antibody sandwich method. The phosphorylation of activated protein kinase / c-Jun amino terminal kinase (SAPKP / JNK), extracellular signal-regulated kinase 1 / 2 (ERK1 / 2) and p38 was detected by Western blot, and the changes of lamps on NF- 魏 B and AP-1 DNA-binding activities in THP-1 cells were analyzed by gel migration lag assay (EMSA). THP-1 cells were then incubated with different concentrations of SAPKP / JNK inhibitor SP600125 ERK1 / 2 specific inhibitor PD98059 / p38 or NF- 魏 B specific inhibitor SB203580 or NF- 魏 B specific inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) for 30 min, and then added 3 渭 g/ml lamps to stimulate 24 h Elisa. The influence of CKs is generated by the derivation. Results: (1) different concentrations of lamp (s 0.5 渭 g/ml~3 渭 g/ml) could induce TNF- 伪 g/ml~3 尾 and IL-6 production in THP-1 cells in a dose-dependent manner. When the concentration of lamps was higher than 3 渭 g/ml, the production of IL-1 尾 and IL-6 in THP-1 cells was significantly decreased. 2 the phosphorylated SAPK-1 / JNK1 / 2p38 and ERK1 / 2 bands reached the peak after 30 minutes, and then decreased gradually. The total amount of SAPK- / JNK1 / 2 and p38 (both phosphorylation and non-phosphorylation) remained almost constant at different time periods, and lamps also increased the DNA-binding activity of NF- 魏 B and AP-1. The peak of TNF- 伪 and IL- 尾 induced by LAMPs was inhibited in a dose-dependent manner, but IL-6 was not inhibited by SP600125, but the production of TNF- 伪 and IL- 尾 was not affected by SP600125, but the production of TNF- 伪 and IL- 尾 was inhibited by SP600125 in a dose-dependent manner. SB203580 and PDTC inhibited the production of three kinds of CKs, TNF- 伪, IL-1 尾 and IL-6. Conclusion: (1) mg lamps can induce THP-1 to produce TNF- 伪 IL-1 尾 and IL-6; 2LAMPs can activate MAPKsNF-kB and AP-1of THP-1 cells; 3LAMPs can activate THP-1 cell line MAPKsNF-kappa B and AP-1. The production of CKs in THP-1 cells is related to the activation of MAPKsN-魏 B.
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R375

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