色素上皮细胞衍生因子的实验研究

发布时间：2018-07-15 14:23

【摘要】：色素上皮细胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor, PEDF)是近年来发现的最有效的内源性新生血管抑制因子。它只作用于活化的血管内皮细胞,具有高效性、特异性及安全性等特点。由于胚胎来源受限,国外学者通过DNA 体外重组技术克隆表达PEDF,并对其进行的研究相对于其它抑制因子还不是很多,国内学者在这方面的研究就更少。鉴于此,我们在国内首次通过从胚胎中钓取PEDF 的总RNA,采用RT-PCR 技术,得到PEDF 的全基因序列,通过双酶切(EcoRI/SalI),采用现今最有效的原核表达系统--pET28a 原核表达载体,构建了pET28a/PEDF 原核表达重组体,并转化至原核表达宿主菌大肠杆菌BL21 中克隆、表达,并通过一步法的Ni2+螯合层析对表达的重组人PEDF 进行了纯化,得到的可溶性重组人PEDF 的纯度在90%以上。 通过体内及体外实验,在细胞水平观察了克隆表达的重组人PEDF 对人血管内皮细胞增殖及迁移的作用;在活体水平观察了重组人PEDF 对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管及兔角膜碱烧伤后新生血管的作用。实验结果证明,我们克隆表达的重组人PEDF 对人血管内皮细胞增殖及迁移、鸡胚绒毛尿囊膜及兔角膜碱烧伤后新生血管均有显著抑制作用,并呈量效关系。其作用靶位点为活化的新生血管的内皮细胞。 我们利用中科院大连化学物理研究所生物医学材料工程组的先进技术对PEDF 应用剂型进行了研究,制备了直径在300-400μm 之间的注射型重组人PEDF 微囊,构建了重组人PEDF 的缓释
[Abstract]:Pigment epithelium-derived factor (PEDF) is the most effective endogenous angiogenic inhibitor found in recent years. It acts only on activated vascular endothelial cells and has the characteristics of high efficiency, specificity and safety. Due to the limited source of embryos, foreign scholars clone and express PEDFs by DNA recombination in vitro, and there are few researches on PEDFs compared with other inhibitors. In view of this, for the first time in China, we obtained the whole gene sequence of PEDF by using RT-PCR technique by fishing the total RNA of PEDF from embryos, and using the prokaryotic expression vector pET28a, which is the most effective prokaryotic expression system-pET28a by double enzyme digestion (EcoRI / SalI). A prokaryotic expression recombinant pET28a / PEDF was constructed and transformed into E. coli BL21. The recombinant human PEDF was purified by one step Ni 2 chelation chromatography. The purity of soluble recombinant human PEDF was above 90%. The effects of recombinant human PEDF on proliferation and migration of human vascular endothelial cells were observed in vitro and in vivo. The effects of recombinant human PEDF on chorioallantoic membrane neovascularization and rabbit corneal neovascularization after alkali burn were observed in vivo. The results showed that the recombinant human PEDF could significantly inhibit the proliferation and migration of human vascular endothelial cells, chorioallantoic membrane and neovascularization after alkali burn of rabbit cornea in a dose-dependent manner. The target site was activated neovascularization endothelial cells. Using advanced technology of biomedical materials engineering group of Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences, we have studied the application form of PEDF. The injectable recombinant human PEDF microcapsules with diameter of 300-400 渭 m were prepared and the sustained release of recombinant human PEDF was constructed.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R341

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本文编号：2124366