染色质组装相关因子的分离、纯化及染色质为模板hsp90α基因热诱导转录的研究

发布时间：2018-07-22 10:27

【摘要】：目的:真核细胞基因组DNA 包含于染色质中,DNA 围绕组蛋白八聚体形成的核小体是染色质的基本构成单位。所形成的染色质除了包装DNA 外,还可通过其结构的调整,即组蛋白共价修饰和ATP 依赖的染色质重塑复合物,有效地“开/关”DNA,诱导或阻遏转录激活子与DNA 的结合,从而促进或抑制基因的表达。核心组蛋白尾部发生的多种共价修饰包括乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素化、SUMO 化等,参与基因的激活与抑制调控过程,形成组蛋白密码,成为一种重要的表观遗传标志。我们通过建立一种染色质体外组装体系,为更好的研究组蛋白修饰及各种修饰之间的相互作用对基因转录调控的作用奠定了基础。 在染色质组装过程中(H3/H4)2 四聚体首先与DNA 结合,随后H2A/H2B 两个异源二聚体再结合到(H3/H4)2结合处的5’和3’DNA 上形成核小体。研究表明许多分子伴侣参与核小体形成,大多是核心组蛋白的结合蛋白,如核小体组装蛋白-1(nucleosome assembly protein-1, NAP-1)可以优先与组蛋白H2A 和H2B 结合,协助组蛋白与DNA 的结合。据此,我们从HeLa 细胞中提取纯化核心组蛋白,并应用昆虫表达体系表达、提取染色质组装相关因子NAP-1,从而为进一步在染色质模板上研究基因表达调控机制提供有效的方法。
[Abstract]:Aim: eukaryotic genomic DNA contained in chromatin is the basic unit of chromatin which is formed around histone octamer. In addition to packaging DNA, chromatin can effectively "turn on / off" DNA and induce or suppress the binding of activator to DNA by adjusting its structure, that is, histone covalent modification and ATP-dependent chromatin remodeling complex. In order to promote or inhibit gene expression. Many covalent modifications of core histone tail include acetylation phosphorylation methylation ubiquification and so on which are involved in the activation and inhibition of gene regulation and formation of histone code as an important epigenetic marker. We have established a chromatin assembly system in vitro, which provides the basis for a better study of protein modification and the interaction between various modifications on the regulation of gene transcription. During chromatin assembly, (H3 / H4) 2 tetramer first binds to DNA, then H2A / H2B heterodimer binds to (H3 / H4) 2 binding site to form nucleosome on (H3 / H4) 2 binding site. Many molecular chaperones are involved in nucleosome formation, most of them are binding proteins of core histone, such as nucleosome assembly protein 1 (nucleosome assembly protein-1 (NAP-1), which can preferentially bind to histone H2A and H2B to facilitate the binding of histone to (nucleosome assembly. Therefore, we extracted and purified the core histone from HeLa cells, expressed it in insect expression system, extracted the chromatin assembly related factor (NAP-1), and provided an effective method for further study on the regulation mechanism of gene expression on chromatin template.
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R346

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本文编号：2137127