呼吸道合胞病毒G蛋白亚单位粘膜疫苗的研究

发布时间：2018-07-28 20:08

【摘要】： 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)是世界范围内引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体之一，全球每年有近四百万儿童受其感染，给人们造成了巨大的财产损失和精神痛苦，目前还没有一种安全有效的疫苗问世。本研究首次通过替换G蛋白的CX3C模序来降低肺部嗜酸性粒细胞的数目，通过改造过的G蛋白与粘膜佐剂LT物理混合后免疫小鼠，增强疫苗在呼吸道的sIgA，来增强疫苗免疫的效果。 人工合成G蛋白基因的部分核酸序列，并通过PCR将其中所存在的CX3C模序替换为RSV M蛋白上的CTL表位，构建表达载体G／pET22b和改造过的G(CTL)／pET22b，转入大肠杆菌BL21(DE3)中，，G蛋白和G(CTL)蛋白在大肠杆菌中均有高效表达。在37℃下诱导的蛋白占总蛋白的30％以上。应用His-Tag与金属离子的亲和力对目的蛋白进行了纯化，纯度大于92％。 用纯化的目的蛋白与无毒型菌热不稳定肠毒素(LT)进行物理混合后进行免疫，分别设立A：PBS；B：LT；C：G(CTL)蛋白+LT；D：G蛋白(含CX3C)。共四组，分别在0、1、4周进行免疫。免疫后，针对血清中IgG、IgA和呼吸道上的sIgA及嗜酸性粒细胞的数量进行测定。结果表明：C组和D组小鼠血清中IgG明显高于A组和B组，几何平均滴度分别为1995.26和1584.89。IgA只出现在C组的血清和呼吸道中，几何平均滴度分别为1781.23和3.167，而在A、B、D组都没有；C组小鼠血清和呼吸道内的嗜酸性粒细胞的数目与A组没有显著性的差异，但D组的嗜酸性粒细胞数目明显高于其它两组。 本研究成功地表达了RSV G蛋白和G(CTL)蛋白，对其进行纯化，并对疫苗样品的免疫原性进行测定。针对G蛋白CX3C模序的改造使肺内嗜酸性粒细胞的数量相比对照组没有增加。通过G蛋白与粘膜佐剂LT混合后免疫小鼠，不仅提高了小鼠血清中的抗体滴度，而且还使血清和呼吸道中IgA的分泌增加，增强疫苗的粘膜免疫效果。呼吸道合胞病毒G蛋白亚单位粘膜疫苗的成功构建，将为RSV疫苗的开发开辟一条新的途径，为进一步研究G蛋白在RSV的致病机理中的作用和研制RSV疫苗奠定基础。
[Abstract]:Respiratory syncytial virus (RSV) is one of the main pathogens of infantile lower respiratory tract infection in the world. Nearly 4 million children worldwide are infected with RSV every year, which has caused great property loss and mental suffering to people. There is no safe and effective vaccine yet. In this study, the CX3C motif of G protein was replaced to reduce the number of eosinophil in lung for the first time. The immunized mice were immunized with modified G protein and mucosal adjuvant LT to enhance the immune effect of the vaccine in the respiratory tract. Some nucleic acid sequences of G protein gene were synthesized, and the existing CX3C motifs were replaced by CTL epitopes on RSV M protein by PCR. The expression vector G/pET22b and modified G (CTL) / pET22b were constructed and transferred into Escherichia coli BL21 (DE3). Both G protein and G (CTL) protein were highly expressed in E. coli. The protein induced at 37 鈩

本文编号：2151437