NY-ESO-1单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

发布时间：2018-08-19 15:30

【摘要】：目的：在恶性肿瘤特异性诊断治疗中，广谱癌基因以其潜在的应用价值成已成为应用研究热点。在诊断应用中，利用单克隆抗体检测肿瘤特异抗原成为临床诊断的重要组成部分，同时应用肿瘤特异性抗原激活抗原提呈细胞进行免疫治疗，也正在成为重要的肿瘤辅助治疗手段，肿瘤抗原已经成为目前的研究热点。NY-ESO-1抗原是近年发现的一种肿瘤特异性抗原，属于癌症睾丸抗原(cancer-testis antigen，CTA)家族。NY-ESO-1，在正常组织只表达于睾丸、胎盘(这些组织由于不表达MHC-Ⅰ类分子，不能成为免疫攻击的目标，属于免疫特权部位能得以免疫豁免)，在肿瘤组织中NY-ESO-1抗原广泛表达。我们通过基因克隆制备人NY-ESO-1全基因，并将其构建于表达载体PGEX-4T-2中，得到重组表达载体PGEX-4T-2／NY-ESO-1，将PGEX-4T-2／NY-ESO-1转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达，，得到的融合蛋白经纯化后进行动物免疫，制备多克隆抗体，通过建立NY-ESO-1单克隆抗体杂交瘤细胞系，制备抗NY-ESO-1单克隆抗体，确定其免疫学特性后，用于检测NY-ESO-1在乳癌中的表达，判断NY-ESO-1与乳癌的发生发展之间的关系。 方法：将人黑色素瘤NY-ESO-1重组表达载体PGEX-4T-2／NY-ESO-1(本室保存)转化的BL21大肠杆菌，通过IPTG诱导表达后，获得可溶性融合蛋白。融合蛋白经谷胱甘肽-S-转移酶亲和层析柱纯化，免疫Balb／c小鼠。用传统方法进行细胞融合后，采用本室改良的细胞筛选方法制备了鼠抗人单克隆抗体，并对得到的单克隆抗体进行了特异性、亚类和亚型等的鉴定。对乳癌组织进行免疫组化，检测NY-ESO-1的蛋白表达并进行统计。 结果：成功诱导表达PGEX-4T-2／NY-ESO-1转化的BL21大肠杆菌，得到纯度＞90％的GST-NY-ESO-1蛋白，进行牛凝血酶切割后，得到纯化的NY-ESO-1蛋白。成功免疫Balb／c小鼠，得到血清效价1：20000的小鼠。进行传统细胞融合后，进行ELISA筛选，筛选
[Abstract]:Objective: in the specific diagnosis and treatment of malignant tumor, broad spectrum oncogene has become a hot research field for its potential application value. In diagnostic application, the detection of tumor specific antigen by monoclonal antibody becomes an important part of clinical diagnosis, and the tumor specific antigen activated antigen presenting cell is used for immunotherapy. Tumor antigen is becoming an important adjuvant therapy for cancer. Tumor antigen has become a hot research topic. NY-ESO-1 antigen is a kind of tumor-specific antigen discovered in recent years. It belongs to the cancer-testis antigens family. NY-ESO-1 is expressed only in testis in normal tissues. Placenta (these tissues can not be the target of immune attack because they do not express MHC- 鈪

本文编号：2192081