NMDA受体与AMPA受体亚单位在培养海马神经元树突上的表达及共定位

发布时间：2018-09-08 15:47

【摘要】：目的 :研究含 NR2 B亚单位的 NMDA受体 (以下简称 NR2 B- NMDAR)与含 Glu R2亚单位的 AMPA受体 (以下简称 Glu R2 - AMPAR)在不同发育阶段的培养海马神经元树突上的表面表达及共定位。方法 :以 FL AG- NR2 B、GFP- Glu R2及 CFP- Actin的表达载体共转染原代培养 5 d的大鼠海马神经元 ,分别用抗 FL AG单克隆抗体和山羊抗鼠二抗 - Cy3(红色荧光 )、抗 GFP多克隆抗体和山羊抗兔二抗 - Alex4 88(绿色荧光 )作活细胞双重染色 ,显示并计数表面表达的 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - AMPAR受体簇以及两者共定位的受体簇。结果 :培养 7d和 19d时 NR2 B- NMDAR受体簇密度分别为 39.7± 5 .0和 6 4.7± 6 .1(P0 .0 1;n=6 ) ;Glu R2 - AMPAR受体簇密度分别为 5 9.1± 3.3和 99.7± 6 .4 (P0 .0 1;n=6 ) ;两者共定位的受体簇密度分别为 2 9.9± 4 .5和 37.5± 2 .5 (P0 .0 5 ;n=6 )。培养 7d和 19d时 ,与 Glu R2 - AMPAR共定位的 NR2 B- NMDAR受体簇占总 NR2 B- NMDAR受体簇的比例分别 75 .4 %和 5 7.9% ,而与 NR2 B- NMDAR共定位的 Glu R2 - AMPAR受体簇占总 Glu R2 - AMPAR受体簇的比例分别为 5 0 .6 %和 37.6 %。结论 :随着海马神经元的发育 ,成熟神经元比未成熟神经元树突表面 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - A
[Abstract]:Objective: to study the effects of NMDA receptor (NR2 B- NMDAR) containing NR2 B subunit and AMPA receptor (Glu R2-AMPAR) containing Glu R2 subunit on the dendrites of cultured hippocampal neurons in different developmental stages. Surface expression and co-localization. Methods: the primary cultured hippocampal neurons of rats were co-transfected with the expression vectors of FL AG- NR2 BFP-GFP- Glu R2 and CFP- Actin for 5 days. Live cell double staining was performed with monoclonal antibody against FL AG and anti-mouse second antibody Cy3 (red fluorescence), anti-GFP polyclonal antibody and goat anti-rabbit second antibody Alex4 88 (green fluorescence), respectively. The surface expression of NR2 B NMDAR receptor cluster Glu R2 AMPAR receptor cluster and co-located receptor cluster were displayed and counted. Results: the density of NR2 B- NMDAR receptor cluster was 39.7 卤5. 0 and 64. 7 卤6. 1 (P0. 01). The density of Glu R2-AMPAR receptor cluster was 59. 1 卤3. 3 and 99. 7 卤6. 4 (P0. 01). The densities of colocalized receptor clusters were 29.9 卤4.5 and 37.5 卤2.5respectively (P0. 05). After 7 days and 19 days of culture, NR2 B NMDAR receptor clusters co-located with Glu R2 AMPAR accounted for 75. 4% and 57. 9% of total NR2 B NMDAR receptor clusters, respectively. The percentage of Glu R2-AMPAR receptor cluster colocated with NR2 B-NMDAR was 50. 6% and 37. 6% of total Glu R 2-AMPAR receptor cluster, respectively. Conclusion: with the development of hippocampal neurons, the NR2 B- NMDAR receptor cluster on the dendritic surface of mature neurons is higher than that of immature neurons.
【作者单位】： 浙江大学医学院神经生物学教研室 浙江大学医学院神经生物学教研室 浙江大学医学院神经生物学教研室 浙江大学医学院神经生物学教研室 浙江大学医学院神经生物学教研室 浙江大学医学院神经生物学教研室
【基金】：国家“973”计划基金 (G19990 5 4 0 0 3) 国家自然科学基金 (39970 84 4 )资助项目
【分类号】：R329

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2230972