HBsAg和B19 VP2复合抗原的基因克隆及表达

发布时间：2018-09-10 18:44

【摘要】：背景与目的： 人微小病毒B19(Human Parvovirus B19)是微小病毒科微小病毒属中目前已知的唯一使人类致病的病毒，也是动物病毒中体积最小结构最简单的DNA病毒。主要经呼吸道和血液途径传播，可引起社区局部流行。自1990年首次证实我国存在该病毒后，陆续报告B19病毒感染是我国孕妇非免疫性流产、儿童急性再障危象、急性血小板减少性紫癜等疾病的重要病因之一。现己证实该病毒同多种儿童及成人疾病有关。同时，我国妇女和儿童血清中保护性抗体水平低，易发生该病毒感染。尤其免疫功能低下或缺陷患者可发生持续感染和慢性贫血，危及生命。且随着检测手段的改进及研究的深入，其疾病谱还在不断扩大。B19病毒基因组长约5.6kb，编码两个结构蛋白(VP1和VP2)及一个主要的非结构蛋白(NS1)。B19病毒衣壳蛋白主要由VP2蛋白组成，VP1蛋白不超过衣壳蛋白的10％，其独特区暴露在病毒的表面。B19病毒感染引起的机体免疫反应主要是针对其结构蛋白VP1和VP2，而VP1除在其氨基端有—227个氨基酸的独特区外，其余与VP2相同。乙型肝炎病毒(HBV)的感染在人群中比例很高，且感染后体内能形成的主要保护性抗体为针对表面抗原(HBsAg)的表面抗体(抗-HBs)。本课题的目的是选择B19-VP2抗原基因和HBsAg基因重组，利用pGEX-5X-1原核表达载体表达，从而建立表达B19和HBV复合抗原系统，并检测此复合抗原的抗原性，，给HBV和B19病毒重组多价疫苗的研制和复合诊断试剂提供抗原。 方法： 根据GenBank收录的HBV及B19病毒序列，设计PCR引物，并在每条引物前分别加入一定的内切酶位点。利用PCR和分子克隆技术，从含HBV病毒全基因的重
[Abstract]:Background & objective: human parvovirus B19 (Human Parvovirus B19) is the only known human pathogenic virus in the parvovirus genus of the parvovirus family. It is also the smallest and simplest DNA virus in animal viruses. Spread mainly through respiratory and blood channels can cause local epidemics in the community. Since the existence of the virus was first confirmed in China in 1990, it has been reported that B19 infection is one of the important causes of non-immune abortion in pregnant women, acute aplastic crisis in children, acute thrombocytopenic purpura and other diseases in China. It has been confirmed that the virus is associated with a wide range of childhood and adult diseases. At the same time, the level of protective antibody in serum of Chinese women and children is low. In particular, patients with low or defective immune function may suffer from persistent infection and chronic anemia, which can be life-threatening. And with the improvement of detection methods and the deepening of research, The genome length of the virus is about 5.6 kb, which encodes two structural proteins (VP1 and VP2) and a major non-structural protein (NS1) .B19 virus capsid protein, which is composed mainly of VP2 proteins, and the VP1 protein does not exceed 10 kb of capsid protein. The immune response caused by the exposure of the unique region to the surface of the virus. B19 virus infection was mainly directed against its structural proteins VP1 and VP2, while VP1 was the same as VP2 except for the unique region with -227 amino acids at its amino terminal. Hepatitis B virus (HBV) infection is a high proportion in the population, and the main protective antibody formed in the body after infection is the surface antibody against surface antigen (HBsAg) (anti-HBs). The purpose of this paper is to select B19-VP2 antigen gene and HBsAg gene recombination, express by pGEX-5X-1 prokaryotic expression vector, and then establish the expression system of B19 and HBV complex antigen, and detect the antigenicity of the complex antigen. It provides antigens for the preparation of recombinant multivalent vaccine of HBV and B 19 virus and the compound diagnostic reagent. Methods: according to the HBV and B19 virus sequences included in GenBank, PCR primers were designed, and some endonuclease sites were added to each primer. Using PCR and molecular cloning techniques, the weight of the whole gene containing HBV virus
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

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本文编号：2235295