TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在大鼠全胚及心、肝、肺、肾发育过程中的表达

发布时间：2018-09-12 06:24

【摘要】： 转化生长因子β(transforming growth factor beta，TGFβ)是一组具有多种功能的细胞因子，它广泛参与调节细胞的众多生物学作用，同时在胚胎生长，器官发育中也发挥着极其重要的功能。TGFβ1是转化生长因子家族中的一个亚型，它与妊娠的维持和胚胎的正常发育密切相关。TGFβ1通过与细胞表面特异性受体结合发挥其生物学作用，其中与转化生长因子β型受体I和受体Ⅱ(transforming growth factor betaⅠ、Ⅱtype receptor，TβRⅠ、TβRⅡ)共同构成配体—受体三元复合物，该三元复合物是实现TGFβ1胞内效应的关键。 本次试验研究首先运用了半定量RT-PCR的技术方法。为尽量保证PCR反应是在平台期前的线性范围内进行，在行该检测方法时运用了逐步测试并结合BIO-RAD Quantity One软件进行每一轮的分析，从而确定各个因子PCR反应的循环参数。为避免误差，每确定一个因子的循环次数时重复该实验步骤3次。发现三个因子的半定量RT-PCR循环次数均为28次。将β-actin与待扩因子放在同一管中扩增时设计了竞争实验，发现β-actin与TGFβ1、β-actin与TβRⅠ、β-actin与TβRⅡ在同一管反应体系中都可以扩增出良好的电泳条带。基于上述的实验理论，我们运用半定量RT-PCR技术最后初步检测了TGFβ1及TβRⅠ与TβRⅡ在13～17dSD大鼠胚胎全胚中的表达变化情况，发现TGFβ1在13～16d中表达是逐渐增加的，其中15d，16d是高峰，17d明显下降；TβRⅠ与TβRⅡ在该发育阶段的表达总趋势为递增，其中大约在17d二者都出现表达的高峰。在15～17d中三个因子的整体变化最大，故将组织学与免疫组化的多数观察时点选在15～17d。 其后，本实验用免疫组织化学染色方法观察上述三个因子在SD胎鼠15～17d中于心、肝、肺、肾等不同组织器官内的时空表达特点，发现TGFβ1和TβRⅠ、TβRⅡ在心发育13～17d中都有较强的阳性颗粒出现，，且不同时间点内的表达程度基本一致。唯独在瓣膜结构处三个因子的表达一直为阴性。13～17d中，肝实质内的TGFβ1无阳性表达，而TαRⅠ和TβRⅡ随肝脏的发育出现动态性的改变，前者的表达量逐渐增加而后者则逐渐减少。肾脏内TβRⅠ出现的最早，TGFβ1和TβRⅡ出现的时间基本一致；TβRⅠ与TβRⅡ在肾内的表达情况大致相似而TGFβ1的表达仅局限于管腔状结构的上皮细胞内。15～17d中，肺间充质细胞TGFβ1的表达是随胎龄的增加而增加，TβRⅠ在表达上无明显改变，TβRⅡ的表达先增加后降低；相同时间点内，三个因子在肺内终蕾柱状上皮内的阳性表达都表现为先增加后降低的趋势。 总之，TGFβ1与TβRⅠ、TβRⅡ随着大鼠胚胎的发育，不同组织部位有着不同时相性的表达规律。这让我们认识到TGFβ信号传导通路在胚胎发育过程中的重要性，同时TβRⅠ、TβRⅡ与TGFβ1的表达不一致性也让我们推测TβRⅠ、TβRⅡ在与TGFβ1组成信号通路之外也许有自身独立的作用方式。
[Abstract]:Transforming growth factor 尾 (transforming growth factor beta,TGF 尾 (TGF- 尾) is a group of cytokines with many functions. TGF- 尾 1 is also a subtype of the transforming growth factor family, which is closely related to the maintenance of pregnancy and the normal development of embryos. TGF 尾 1 plays a biological role by binding to specific receptors on cell surface. The ligand receptor ternary complex is composed with transforming growth factor 尾 receptor I and receptor 鈪

本文编号：2238170