人骨形态发生蛋白-2真核表达质粒的制备、转染及表达

发布时间：2018-10-11 13:03

【摘要】：目的制备含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的真核表达质粒,获得可稳定高效表达BMP-2的兔骨髓基质细胞,为进一步研究BMP-2在骨牵张区的成骨作用作准备。方法制备携带有hBMP-2的全长真核表达质粒pcDNA3.1-BMP2。通过脂质体法将所得到的重组真核质粒转染到兔骨髓基质细胞中,用G418进行梯度筛选,从而得到能够稳定表达hBMP-2的细胞克隆。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓基质细胞(MSCs)hBMP-2 mRNA的表达。结果重组质粒通过EcoRI酶切后,电泳图示约1.5 kb的hBMP-2的目的片段及5.5 kb的载体片段,经测序显示核苷酸序列正确无误。经RT-
[Abstract]:Objective to prepare eukaryotic expression plasmid containing human bone morphogenetic protein-2 (hBMP-2) gene and obtain rabbit bone marrow stromal cells which can express BMP-2 stably and efficiently in order to further study the osteogenesis of BMP-2 in distraction zone. Methods the full-length eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-BMP2. carrying hBMP-2 was prepared. The recombinant eukaryotic plasmid was transfected into rabbit bone marrow stromal cells by liposome method, and then G418 was used for gradient screening to obtain the cell clones which could express hBMP-2 stably. The expression of (MSCs) hBMP-2 mRNA in bone marrow stromal cells was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results after the recombinant plasmid was digested by EcoRI, the target fragment of about 1.5 kb hBMP-2 and the vector fragment of 5.5 kb were shown by electrophoresis. The sequence showed that the nucleotide sequence was correct. Via RT-
【作者单位】： 东南大学附属中大医院整形外科 东南大学附属中大医院整形外科
【基金】：江苏省卫生厅重大项目基金资助(H200201)
【分类号】：R346

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 顾俊彦,黄盛东,李白翎,梅举,张宝仁;aFGF重组腺病毒载体的构建、转染效率和使用安全性的初步研究[J];现代医学;2002年04期

【共引文献】

相关期刊论文 前1条

1 王传玺,韩金祥,鲁艳芹;基因转移技术中几种常见的病毒载体[J];生命的化学;2004年03期

相关硕士学位论文 前1条

1 吴剑;重组腺病毒AD-GFP-NM23-H1的体外表达及对肿瘤细胞增殖能力的影响[D];昆明医学院;2007年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 章斌,梅举,黄盛东,张宝仁,顾俊彦;人酸性成纤维细胞生长因子基因重组腺病毒粘粒载体的构建[J];皖南医学院学报;2002年04期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 叶伟胜,郭善一,蔡芳,陈棣,张镜宇;骨形态发生蛋白-2的体外表达及其成骨作用[J];中华医学杂志;1998年06期

2 杜俊杰,胡蕴玉,罗卓荆,吕荣;β转化生长因子增强人重组骨形态发生蛋白-2诱导成骨的调节机理[J];中国矫形外科杂志;1998年06期

3 栾晨光;抗血管形成剂抑制骨形态发生蛋白-2诱导的异位骨化[J];国外医学.骨科学分册;1998年04期

4 杜俊杰,胡蕴玉,罗卓荆,吕荣,马占忠;人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用(英文)[J];第四军医大学学报;1999年07期

5 刘礼初,梁国栋,杜靖远,付士红,陈飞,郑启新,肖宝筠,侯云德;重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定[J];同济医科大学学报;1999年04期

6 刘宏,吴织芬,王勤涛;胰岛素样生长因子-Ⅰ和骨形态发生蛋白-2对人牙周膜细胞增殖的作用[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1999年01期

7 杜俊杰,胡蕴玉,罗卓荆,吕荣,王军,桑宏勋,李丹;碱性成纤维细胞生长因子增强人重组骨形态发生蛋白-2诱导成骨的调节机理[J];中国矫形外科杂志;1999年07期

8 郭若霖,郭善一,鲍秋野,张镜宇;竞争性RT-PCR测定法及BMP-2mRNA的定量检测[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年05期

9 薛元锁!100700,时述山!100700,李亚非!100700,梁毅!100700;激素性股骨头坏死病程中骨形态发生蛋白-2的改变及其意义[J];中华实验外科杂志;2000年05期

10 郁卫东!121001,秦书俭!121001;骨形态发生蛋白-2在骨形成过程中的作用机制[J];中国临床解剖学杂志;2000年01期

相关会议论文 前2条

1 周诺;麦华明;梁飞新;韦山良;;BMP-2、bFCF在下颌骨牵张成骨中表达的对比研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年

2 夏胜利;戴\戎;汤亭亭;毛远青;李慧武;林在俊;;重组人BMP-2骨诱导中神经生长因子及其受体的表达[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年

相关博士学位论文 前2条

1 韩利华;脉冲电磁场防治骨质疏松症的体内外实验研究[D];第四军医大学;2004年

2 李军;骨形态发生蛋白-2转染骨髓基质细胞的生物学特性和其骨诱导修复作用[D];第四军医大学;2004年

相关硕士学位论文 前6条

1 赵国阳;骨痛仙胶囊对实验性骨折家兔骨形态发生蛋白及其mRNA表达影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2004年

2 柴继宇;TGF-β1、Collagen type Ⅱ和BMP-2在胸椎黄韧带骨化中表达的实验研究[D];天津医科大学;2005年

3 王雅宁;骨形态发生蛋白-2和胰岛素样生长因子-1对正常和低碘大鼠成骨细胞作用的研究[D];天津医科大学;2006年

4 闫楷忠;CPC/rhBMP-2复合材料促进骨质疏松大鼠骨折愈合的实验研究[D];东南大学;2005年

5 康春雨;人骨形态发生蛋白-2真核表达质粒的制备、转染及表达[D];东南大学;2005年

6 杨贺杰;二磷酸盐对成骨细胞增殖及分化成熟的实验研究[D];浙江大学;2007年

，

本文编号：2264292