邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）致附睾生殖毒性及锌保护作用研究

发布时间：2018-11-25 22:47

【摘要】： 研究背景:随着现代工业发展,环境污染对人类和动物的危害已成为国际性研究热点。前期研究提示,某些广泛存在于环境中的外来化合物(主要是人工合成化合物)可通过各种途径富集于人和动物体内,干扰内源性激素的合成、分泌、释放、运输、结合、效应及清除等各个环节,显出模拟或拮抗内源性激素的作用,从而导致生殖功能下降、生殖系统畸形和恶性肿瘤等的发病率增加。该类化合物被称为环境内分泌干扰因子(Environmental endocrine disruptors, EEDs)。在众多的EEDs中,邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP],作为一种广泛应用于塑料及化工产业的增塑剂,近年来已被认为是一种重要的EEDs。 流行病学调查显示全球范围男性精液质量呈下降趋势,已有研究表明这种现象与EEDs的抗雄激素作用有关。附睾作为精子成熟和获能的重要场所,附睾上皮细胞在此过程中发挥着重要作用。我们推测EEDs损害附睾上皮细胞可能是导致精液质量下降、附睾功能障碍的重要环节,为此我们拟通过动物实验探讨DEHP对附睾的病理及功能损害的机制,并探寻保护因子,对针对性治理环境污染、预防和改善男性生殖功能障碍、促进人类健康具有重要的意义。 目的:探讨DEHP对附睾的生殖毒性和生殖内分泌干扰的机理,探寻DEHP毒性作用的拮抗剂。 方法:实验分为体内和体外实验两部分,实验对象为雄性昆明小鼠。(1)体内实验:实验动物选择性未成熟期(PND20)的雄性小鼠和性成熟期(PND50)雄性小鼠,每期动物随机分为四组:正常对照组、玉米油组、DEHP组和DEHP+葡萄糖酸锌组。各组动物经灌胃建立染毒模型,每天连续灌胃10天后处死动物,进行以下检测:附睾重量测量,附睾组织光镜和电镜观察,平均附睾管直径和附睾上皮高度测量,免疫组织化学法(SABC)检测附睾组织中AR及ER表达水平。(2)体外实验:选取PND20和PND50小鼠附睾分别进行附睾上皮细胞原代培养,在培养第三天,将不同时期小鼠附睾上皮细胞分别随机分为四组:正常对照组、睾酮对照组、DEHP组和DEHP+葡萄糖酸锌组,第10天终止培养,进行以下检测:附睾上皮细胞增殖生长情况;MTT法测定细胞活力;附睾的功能性指标SA含量、α-1、4-糖苷酶及LDH活性。 结果: 体内实验: 性未成熟期(PND20)雄性小鼠: (1)DEHP组附睾重量较正常对照组、玉米油组、DEHP+葡萄糖酸锌组减轻(p0.01);(2)DEHP组较正常对照组、玉米油组、DEHP+葡萄糖酸锌组平均附睾管腔直径缩小,附睾上皮高度降低(p0.01);(3)光镜观察可见DEHP组附睾上皮细胞空泡变性、脱落、上皮细胞纤毛排列紊乱甚至断裂、附睾间质组织增生、附睾管腔中精子数量减少,正常对照组、玉米油组和DEHP+葡萄糖酸锌组附睾组织未见明确病理改变;(4)透射电镜观察可见DEHP组附睾上皮细胞内线粒体肿胀、粗面内质网池扩张、溶酶体数目增多、管周平滑肌细胞肌纤维减少而线粒体和内质网增生,DEHP+葡萄糖酸锌组仅见附睾上皮细胞内线粒体肿胀,正常对照组和玉米油组附睾组织未见明显异常;(5)DEHP组较正常对照组、玉米油组、DEHP+葡萄糖酸锌组AR表达水平下降(p0.01);(6)DEHP组较正常对照组、玉米油组、DEHP+葡萄糖酸锌组ER表达水平升高(p0.01);(7)正常对照组、玉米油对照组和DEHP+葡萄糖酸锌组间比较,各种实验结果无显著差异。 性成熟期(PND50)雄性小鼠: (1)各组附睾重量比较无显著性差异(p0.05);(2)各组平均附睾管腔直径、附睾上皮高度比较无显著性差异(p0.05);(3)光镜观察各组附睾组织未见明确病理改变;(4)透射电镜观察各组附睾组织未见明确异常;(5)DEHP组较正常对照组AR表达水平下降(p0.01);(6)DEHP组较正常对照组ER表达水平升高(p0.01);(7)正常对照组、玉米油对照组和DEHP+葡萄糖酸锌组间比较,各种实验结果无显著差异。 体外实验: 性未成熟期(PND20)雄性小鼠: (1)MTT试验提示DEHP组细胞活性与正常对照组、睾酮组、DEHP+葡萄糖酸锌组比较降低(p0.01); (2)DEHP组较正常对照组、睾酮组、DEHP+葡萄糖酸锌组SA含量升高(p0.01); (3)DEHP组较正常对照组(p0.05)、睾酮组(p0.01)附睾上皮细胞原代培养上清液中α-1、4-糖苷酶活性降低; (4)DEHP组较正常对照组LDH活性下降(p0.01);(5)正常对照组、睾酮组和DEHP+葡萄糖酸锌组间比较,各种实验结果无显著差异。 性成熟期(PND50)雄性小鼠: (1)MTT试验提示DEHP组细胞活性与正常对照组、睾酮组比较降低(p0.01); (2)DEHP组较睾酮组SA含量升高(p0.01); (3)各组附睾上皮细胞原代培养液上清中α-1、4-糖苷酶活性比较无显著性差异(p0.05);(4)各组LDH活力比较无显著性差异(p0.05);(5)正常对照组、睾酮对照组和DEHP+葡萄糖酸锌组间比较,各种实验结果无显著差异(p0.05)。 结论:(1) DEHP是一种明确的环境内分泌干扰因子,能影响附睾的发育和功能;(2) DEHP可能直接作用于附睾引起其结构和功能的损伤;(3) DEHP对附睾的生殖毒性作用主要发生于性未成熟期;(4)锌对DEHP所致附睾生殖毒性有拮抗作用。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：2357586