双歧杆菌对树突状细胞影响的实验研究

发布时间：2018-12-10 08:00

【摘要】：第一部分外源性双歧杆菌对小鼠肠道树突状细胞数量的影响研究目的: 通过双歧杆菌(bifidobacterium,Bif.)对小鼠肠道树突状细胞(Dendritic Cell,DC)数量的影响研究,探讨 Bif.在体内对 DC 分化、发育的作用,为探索二者的黏膜免疫功能奠定基础。方法: 随机将 4-5 周龄 36 只 Balb/c 小鼠分成四组,分别为活菌组死菌组耗尽培养上清(Spent culture supernatant,SCS)组阴性对照组,每组 9 只。各组分别采用活双歧杆菌菌液(1×109CFU/ml )、灭活双歧杆菌菌液(1×109CFU/ml )、双歧杆菌 SCS、无菌生理盐水灌胃,均为 0.5ml/只.天,连续 7 天。于实验第 9 天处死小鼠,取小肠空、回肠段,做冰冻切片, SP 免疫组织化学法分析检测肠道 DC 数量。结果: 小肠标本肉眼观察无充血、肿胀等病理现象。切片在高倍镜下见组织完整。SP免疫组化方法染色后见DC胞浆及胞膜呈棕黄色,分布于整个空、回肠的黏膜固有层。细胞大小不一,外形不规则,胞核外形亦不规则,多数呈偏心位,且 DC 有不规则突起,与周围细胞有紧密的接触。计数发现,双歧杆菌灌胃后小鼠小肠黏膜固有层 DC数量增加(p0.05),以活菌组作用最明显,死菌组次之,培养上清组作用最弱,经统计学处理有显著差异(p0.05)。结论: 外源性双歧杆菌能增加小鼠小肠黏膜固有层中 DC 的数量, 重庆医科大学硕士研究生学位论文 4 活菌作用最明显。提示双歧杆菌通过胃肠道途径可能影响 DC 的分化、发育;对 DC 的作用可能就是双歧杆菌影响机体免疫功能的重要环节; 且保持活菌状态对机体免疫有重要作用。关键词:双歧杆菌,树突状细胞,小鼠,肠道重庆医科大学硕士研究生学位论文 5 第二部分双歧杆菌对单核细胞来源的树突状细胞成熟及功能影响的体外研究目的: 研究双歧杆菌对正常成年人外周血单核细胞来源的 DC 刺激淋巴细胞增殖功能及分泌细胞因子的影响,进一步探讨双歧杆菌在体外对 DC 分化、成熟及功能的作用。方法:采用淋巴细胞分离液(Ficoll 液)分离正常成年人外周血单个核细胞(Peripheral blood monocular cell,PBMC),贴壁培养获得单核细胞,(1)单独加入热灭活双歧杆菌,倒置光学显微镜观察单核细胞形态是否发生改变,能否诱导成为 DC;(2)以 GM-CSF、 IL-4 联合诱导单核细胞生成未成熟 DC,实验组在培养的第 7 天分别加入不同剂量(100ug/ml 、10ug/ml)热灭活的双歧杆菌,阴性对照组不加,阳性对照组加入 1ug/ml 的脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS),通过倒置光学显微镜、透射电镜、扫描电镜观察,于培养第 9 天检测 DC 刺激同种异体 T 淋巴细胞的增殖情况,ELISA 法检测 DC 培养上清中 IL-12、DC 与淋巴细胞混合培养上清中 IFN-γ的分泌,以确定双歧杆菌在体外对 DC 成熟程度及功能的影响。结果:(1)单用热灭活的双歧杆菌诱导,单核细胞形态没有发生改变;(2) GM-CSF、IL-4 加双歧杆菌诱导单核细胞,形态学鉴定可获得具有典型树突状突起形态的 DC,诱导后的 DC 刺激同种异体 T 淋巴细胞增殖的能力明显增强(p0.01),高剂量组刺激能力最强。培养上清液中检测到各组 DC 分泌的 IL-12 均与阴性对照组有统计学上的差异(p0.05),高剂量双歧杆菌诱导的 DC 分泌 IL-12 的水平最高, 两两比较,低剂量双歧杆菌组与 LPS 组分泌 IL-12 的水平相当 (p0.05)。双歧杆菌和 LPS 诱导的 DC 刺激淋巴细胞分泌 IFN-γ的水
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

【参考文献】