表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

发布时间：2018-12-24 13:08

【摘要】：目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。
[Abstract]:Aim: to construct a recombinant adenovirus expressing human rotavirus nonstructural protein 4 (NSP4) by non replicating adenovirus expression system and evaluate its immunological protective effect. Methods: the shuttle plasmid pshuttle-NSP4, containing wild rotavirus NSP4 gene and adenovirus skeleton plasmid pAdeasy were constructed and packaged in Ad-293 cells to obtain pAd-NSP4 recombinant adenovirus particles after homologous recombination. Electron microscope, RT-PCR, immunofluorescence and other methods were used to identify the characteristics of the virus and its expression in vitro. Mice were immunized by intramuscular injection and nasal drip. Results: the recombinant adenovirus pAd-NSP4, with titer of 108.25CCID50/ml was obtained and the expression of specific target protein was detected by immunofluorescence. The average titers of ELISA were 1: 320 and 1: 1436.8, respectively, and the neutralizing antibody titers were 1: 45.3 and 1: 71.8, respectively. Conclusion: the non-replicating recombinant adenovirus granules expressing rotavirus NSP4 protein have good immunogenicity. Nasal drip is more effective than intramuscular injection in inducing immune response in mice.
【作者单位】： 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所
【基金】：国家科技重大专项资助项目(20132X10004002-003-05)
【分类号】：R373

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2390664