乳猪肝细胞、Kupffer细胞共培养时的生长及功能

发布时间：2019-01-05 02:15

【摘要】：目的 建立稳定高效分离乳猪肝细胞与Kupffer细胞的实验流程，研究乳猪肝细胞与Kupffer细胞共培养时对肝细胞的生长、代谢、解毒等生理功能的影响，为构建高效、经济实用的人工肝系统提供参考数据。方法 采用Ⅳ型胶原酶离体灌注法分离单个乳猪肝细胞，联合percoll液密度梯度离心法分离Kupffer细胞，比较肝细胞单独培养和以不同比例与Kupffer细胞共同培养时对安定和醋氨酚的清除功能和生存时间。结果 采用本方法每头乳猪可分离得到单个肝实质细胞数为(3.5±1.1)×10~9，，活性大于90％±2％。Kupffer细胞的产量平均为(2.35±0.5)×10~8，纯度为95％±4％。肝细胞与Kupffer细胞按12∶1比例混合时较8∶1和16∶1混合时，镜下细胞形态学上生长更好，对安定和醋氨酚的清除显著优于后两者，并且功能可维持两周左右；而以16∶1及8∶1混合和肝细胞单独培养时，肝细胞虽能存活十天以上，但一周左右肝细胞功能就明显减低。结论 1．通过本实验研究成功地建立了以离体肝灌注的Ⅳ型胶原酶消化分离乳猪肝实质细胞及联合Percoll液密度梯度离心法分离Kupffer细胞的实验室操作流程，该流程稳定高效实用，分离得到的肝细胞及Kupffer细胞数量基本能满足生物人工肝对肝细胞数量的要求，可用于构建生物人工肝。2．按8∶1、12∶1和16∶1的比例在体外进行肝实质细胞与Kupffer细胞264小时原代贴壁共同培养实验，实验结果提示，肝实质细胞和Kupffer细胞在适宜的培养条件下可进行大量共培养；这两种肝细胞的同步贴壁简单共培养，肝细胞的生长、解毒及生理功能将受到影响，并且按12∶1比例混合培养时较8∶1和16∶1以及肝细胞单独培养生长及功能上为佳，细胞生物学活性也高，生长也较好，这些数据提示我们当肝细胞和枯否细胞体外共培养时选择合适的比例、时机和方法以及更适合的培养系统是需要的。我们发现12∶1比例生长及功能更好并可用于构建生物人工肝。
[Abstract]:Objective to study the effects of co-culture of porcine hepatocytes and Kupffer cells on the growth, metabolism, detoxification and other physiological functions of porcine hepatocytes. Economical and practical artificial liver system provides reference data. Methods single porcine hepatocytes were isolated by type 鈪

本文编号：2401125