大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用

发布时间：2019-01-05 05:40

【摘要】：从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,得到了6种VH家族基因,11种VL家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上。采用改进的SOEPCR法将VH基因和VL基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,将连接产物电转化大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建了库容为5.58×109的噬菌体单链抗体库。采用BstNI酶切法证明,构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。以TNF-α为靶,从该抗体库中筛选到了抗TNF-α抗体,这说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。
[Abstract]:Total RNA, was extracted from peripheral blood lymphocytes of healthy volunteers who were not actively immunized. Human antibody heavy chain (VH) and light chain (VL) variable region genes were amplified by RT-PCR. Six VH family genes and 11 VL family genes were obtained. These antibody gene families cover more than 95% of the diversity of human antibody genes. The VH gene and the VL gene were linked to the adult single-chain antibody (scFv) gene by modified SOEPCR method, and cloned into the bacteriophage vector pCANTAB5E. The ligated product was electrotransformed into E. coli TG1, and superinfected by auxiliary phage M13KO7. A phage scFv library with a capacity of 5.58 脳 109 was constructed. BstNI digestion showed that the constructed phage scFv library had good diversity. Using TNF- 伪 as the target, the anti TNF- 伪 antibody was screened from the antibody library, which indicated that the antibody library could be used for the screening of human antibody.
【作者单位】： 军事医学科学院放射医学研究所 军事医学科学院放射医学研究所 军事医学科学院放射医学研究所 军事医学科学院放射医学研究所 军事医学科学院放射医学研究所 安徽医科大学
【分类号】：R392.1;

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本文编号：2401351