羟基磷灰石纳米粒载体介导的大鼠肝细胞体内外基因转染实验

发布时间：2019-01-15 23:00

【摘要】：实验一 pEGFP-C1质粒的转化、抽提及鉴定 目的:制备可供基因转染所需的增强型绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1。 方法:采用氯化钙法制备E.coli JM109感受态,将pEGFP-C1转化此感受态菌,经选择性培养基筛选将阳性转化菌落进行扩增。采用碱裂解法小量抽提质粒,经EcoR Ⅰ酶切鉴定为阳性克隆后再扩大培养,用碱裂解法大量抽提,再次酶切鉴定并检测质粒的浓度和纯度。 结果:感受态制备的实验组细菌在含卡那霉素(Kanamycin)的琼脂平板上形成了克隆,而对照组未能形成克隆。抽提的质粒经EcoR Ⅰ酶切后显示一条带,其大小为4.7kb,符合pEGFP-C1的长度。五次质粒大量抽提的pEGFP-C1的A260/A280均在1.8～2.0间,浓度为0.87～1.75μg/μl间。 结论:1.氯化钙法能有效地制备感受态菌,转化pEGFP-C1质粒的E.coli JM109表达Kanamycin抗性基因。2.抽提的质粒经酶切分析证实为pEGFP-C1。3.碱裂解法方法可靠,质量稳定,重复性好,大量抽提的pEGFP-C1浓度和纯度均能满足基因转染的要求。 实验二 羟基磷灰石纳米粒的制备、表面修饰及与DNA的结合 目的:制备经多聚赖氨酸表面修饰的羟基磷灰石纳米粒,研究其与质粒DNA结合的能力。
[Abstract]:Transformation, extraction and Identification of pEGFP-C1 plasmid objective: preparation of enhanced green fluorescent protein pEGFP-C1. for gene transfection Methods: the E.coli JM109 receptive state was prepared by calcium chloride method, and pEGFP-C1 was transformed into this strain. The positive transformed colony was amplified by selective medium screening. The plasmids were extracted by alkaline lysis method, identified as positive clones by EcoR 鈪，

本文编号：2409194