细胞外基质糖基化对表皮干细胞生物学特性的影响

发布时间：2019-05-20 07:11

【摘要】： [目的]糖尿病是日常生活常见疾病之一,糖尿病下肢溃疡是其并发症之一,且经久难愈,因此糖尿病难愈创面成为人们研究的热点。表皮干细胞作为皮肤发生修复重建的关键源泉,糖尿病创面难愈是否与此有关呢?本实验通过探讨细胞基质糖基化对表皮干细胞黏附、增殖、凋亡等生物学行为的影响,进一步寻找糖尿病创面难愈机制。 [方法]利用Ⅳ胶原的快速黏附法分离培养表皮干细胞。然后利用免疫细胞化学和免疫荧光化学分别对角蛋白19和β1整合素进行鉴别。制作并鉴定糖基化Ⅳ胶原,将制备的表皮细胞悬液分别接种在包被有正常Ⅳ胶原和糖基化Ⅳ胶原(胶原糖基化7天,14天,21天)的6孔板上。15分钟后,每个组取3个孔,洗去未黏附细胞,分别计算其黏附率并进行比较;取第2代表皮干细胞,以5×10~3接种于预先包被有正常Ⅳ胶原和糖基化Ⅳ胶原的96孔板内,分别取培养3小时、2天、4天、6天、8天、10天、12天、14天细胞每天取5孔用MTT比色法测OD值,取其平均值并绘制生长曲线图;取第2代成对数生长期的糖基化组和正常胶原组细胞,按200/孔接种6孔板,2周之后测定克隆生成率;表皮干细胞按1×10~6/孔接种于包被有正常胶原和糖基化胶原6孔板上,培养6天和10天后流式细胞仪检测Annexin V Fitc比较两者细胞凋亡情况。 [结果]培养出来的表皮干细胞通过鉴定角蛋白19和β1整合素均有阳性表达;Ⅳ胶原糖基化7天,糖基化Ⅳ胶原的荧光值为1.864±0.126,而此时正常未进行糖基化的Ⅳ胶原荧光值为0.699±0.0831,糖基化14天,糖基化Ⅳ胶原的荧光值为3.051±0.112,而正常Ⅳ胶原荧光值为0.765±0.0927;糖基化21天,糖基化Ⅳ胶原的荧光值为4.416±0.1378,而正常Ⅳ胶原荧光值为0.8254±0.058;胶原在高糖下孵育7天时,糖基化组与正常胶原组黏附率没差异,P值＞0.05;胶原在高糖下孵育14天时糖基化组比正常组黏附率低,P值＜0.05,21天时糖基化组比正常组黏附率显著降低,P值＜0.01;可见随着糖基化程度的加深,对表皮干细胞的黏附率逐渐降低;通过MTT绘制表皮干细胞在正常Ⅳ胶原和糖基化Ⅳ胶原上的生长曲线,可以看出在4天前细胞增殖缓慢,两者间没有差异,6天后开始出现差异,正常胶原组细胞增长速度要快于糖基化组;表皮干细胞在正常Ⅳ胶原和糖基化Ⅳ胶原上的克隆生成率比较:糖基化组为(38.5±1.9)%,正常胶原组为(32.7±1.5)%,糖基化组克隆生成率低于正常组胶原组。P＜0.05;表皮干细胞在正常Ⅳ胶原和糖基化Ⅳ胶原上的凋亡比较:细胞孵育6天时,正常胶原组Annexin V阳性细胞数为(10.7±0.9438)%,而糖基化胶原组为(16.22±0.7912)%;细胞孵育第10天时正常胶原组Annexin V阳性细胞数为(4.66±0.7368)%,而糖基化胶原组为(8.266±0.8177)%。糖基化胶原组较正常胶原组Annexin V阳性细胞数明显增多。P＜0.05 [结论]基质糖基化抑制了表皮干细胞的黏附和增殖,促进了表皮干细胞的凋亡,可能是糖尿病创面难愈机制之一。
[Abstract]:[Objective] Diabetes is one of the common diseases of daily life, and the ulceration of lower limb of diabetes is one of its complications, and it is difficult to heal for a long time. Skin stem cells are the key source of the skin repair and reconstruction. The effects of cell matrix glycosylation on adhesion, proliferation and apoptosis of epidermal stem cells were discussed in this experiment. [Methods] The culture of the skin was isolated by the rapid adhesion of the collagen 鈪，

本文编号：2481457