人源性bFGF Fab抗体体外亲和力成熟的研究

发布时间：2019-07-09 07:54

【摘要】： 目的：在本室构建的bFGF抗体库的基础上，采用定点突变和CDR移步的方法构建突变的bFGF噬菌体抗体库，进多轮筛选获得亲和力提高的Fab抗体。 方法：通过重叠PCR法对重链的CDR3区的八个位点进行NNS(N=A，T，C，GS=GC)突变，回收突变片断，进行SpeⅠ／XhoⅠ双酶切后连接到连有轻链的Pcomb3H载体中，将构建的重组噬菌粒载体电转化XL1-Blue，以辅助噬菌体VCSM13超感染，构建突变库。用bFGF包被酶标板，对抗体库进行4轮固相筛选，获得亲和力提高的bFGF Fab抗体。 结果：将突变的Fd段插入到含有轻链的pComb3H载体中构建人Fab抗体突变库，库容约为2.5×10~6辅助噬菌体超感染后建立了人Fab噬菌体抗体库，滴度为6.5×10~(11)pfu／mL，经过3轮“吸附—洗脱—扩增”的淘选富集，携带有抗bFGF特异性抗体的噬菌体得到了有效的富集；挑选50个克隆进行挽救，，经phage-ELISA检测，获得2个具有高bFGF特异性和高亲和力的Fab噬菌体抗体克隆，可溶性表达，测定亲和力常数，有1株亲和力提高了2.5倍。 结论：利用定点随机突变和热点突变相结合的方法构建突变库，从中筛选到亲和力提高的Fab抗体，Fab抗体亲和力成熟改造提供有效的途径。
文内图片：
图片说明：pComb3H一Fd一K的酶切鉴定Fig3.2ldentifieationofPComb3H一Fd一K
[Abstract]:Aim: on the basis of the bFGF antibody library constructed in our laboratory, the mutant bFGF bacteriophage antibody library was constructed by site-directed mutation and CDR shift, and the Fab antibody with improved affinity was obtained by multiple rounds of screening. Methods: eight sites in the heavy chain CDR3 region were mutated with NNS (N 鈮

本文编号：2511993