反义核苷酸靶向纳米缩合体研究

发布时间：2019-07-11 13:10

【摘要】：非病毒DNA递送系统(nonviral DNA delivery system)已经成为基因治疗的有力工具。良好的非病毒DNA递送系统应该能够有效地穿透细胞膜，并把DNA转运到靶细胞内部。非病毒DNA递送系统的详细转运机制目前还不太清楚，但它们都涉及到DNA缩合(DNA condensation)过程——被递送的DNA都要经历一个塌陷缩合成紧密有序的，仅由一到几个DNA分子组成的纳米微粒的过程。研究表明DNA缩合能够提高DNA的物理化学稳定性；另外由于可以使DNA缩合体表面的zeta电位为正值，而细胞表面带负电荷，使得DNA缩合体(DNA condensates)的转染效率大大提高。本研究的目的是利用DNA缩合技术把反义核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides，ASON)递送到肿瘤细胞内部。这种反义核苷酸能够与人端粒酶逆转录酶的mRNA(human telomerase reverse transcriptase mRNA，hTERT mRNA)互补，抑制人端粒酶逆转录酶的表达，从而在基因水平上达到抑制肿瘤的目的。 本研究分为三部分。第一部分考察了聚赖氨酸(Poly-L-Lysine，PLL)诱导的反义核苷酸缩合，研究了各因素对缩合体的影响。第二部分设计了一条含有16个赖氨酸和一个NGR功能基团的多肽，制备了反义核苷酸靶向纳米缩合体。此NGR功能基团含有的NGR基序是氨基肽酶配体，能够靶向新生血管内皮细胞。第三部分的细胞学初步研究证明反义核苷酸靶向纳米缩合体能够有效地转染肿瘤细胞。
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图片说明： 图1NDA缩合体示意图聚赖氨酸(Poly一L一Lysine，PLL)诱导的反义核昔oetides，ASNO)缩合现象进行了较为系统的研究0:v的反义核昔酸一聚赖氨酸缩合体(ASOND一PLL核昔酸或者聚赖氨酸，从而生成带正电荷或者反义核昔酸一聚赖氨酸缩合体。根据这个研究结的、ezat电位是O衅的反义核昔酸一聚赖氨酸129.3.，ezat电位为34.88耐的反义核昔moleeularass，bly)。并对其反义核昔酸、NGR予核酸酶降解的能力进行了研究。此反义核昔酸治疗所用NDA。
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图片说明： 3.实验结果.31编合体的粒径和耽扭电位各组缩合体的粒径和ezat电位测量结果见表1。图2，图3是正负电荷比为1.00的缩合体的粒径分布图和刀改a电位图;图4，图5是正负电荷比为.047的缩合体的粒径分布图和ezta电位图。实验共重复三次，各测量值是三次实验结果的平均值。表1反义核昔酸一聚赖氨酸缩合体制备条件，粒径和ezat电位组别PH值ASNO浓度(pg/mL)正负电荷比离子强度粒径(阴)Zeta电位m(V)2906:00393661655589七..3939--4l0352318063.918.0..4389.06224195--.4--21.29.2.25l2345678910lll2l3l4l57.397。697。546.508.006.806.357.866.227.106.668.146.958.317.2437.68197‘09113.79172.62149.7674.1653.4888.21123‘5699.84206.8764.08136.65161.71183.330.640.75l，220.590.540.961.341.710.840.471.120。931。90l。331.63(mM)2.500.611.610.120.241.1811.55106。8144.1598.698.598.5417.4105.7114.178.278.5122.491.3100.6788.292.3刃.17一35.910.080.08一.4一38.一22.65实验结果用SAs作回归分析，采用逐步回归法，置信水平为95%，HP值在.622到.831范围内
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 朱振洪,金勇丰,张耀洲;肿瘤基因治疗的研究进展[J];生物学杂志;2001年03期

2 方开泰;均匀设计——数论方法在试验设计的应用[J];应用数学学报;1980年04期

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本文编号：2513182