Genistein对多巴胺能神经元保护作用的体外实验研究

发布时间：2019-07-17 11:33

【摘要】： 第一部分Genistein对MPP~+损伤的多巴胺能神经元及突触素的影响 目的：探讨genistein(GST)对离体培养的帕金森病模型多巴胺能神经元以及突触素表达的影响。方法：取孕14～16天SD大鼠胚胎中脑腹侧，常规体外培养。将培养的中脑腹侧细胞分为四组：正常对照组、E_2+MPP~+组、GST+MPP~+组、MPP~+组。用TH和突触素(synaptophysin，SYN)免疫荧光染色，观察各组TH阳性神经元的生长状况以及突触素的表达：用MAP-2免疫荧光染色，观察各组神经元的生长状况。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力和代谢状态。结果：与正常对照组、E_2+Mpp~+组以及GST+Mpp~+组相比，MPP~+组TH阳性神经元数量少，SYN免疫活性产物表达亦减少，MAP-2阳性神经元减少，细胞活力差，差异有统计学意义。而E_2+MPP~+组、GST+MPP~+组中上述指标与正常对照组相比，差异无统计学意义。 结论：Genistein对体外培养的多巴胺能神经元具有类似雌激素样的神经保护作用。 第二部分Tamoxinfen阻断雌激素受体后genistein对多巴胺能神经元及促凋亡蛋白bax表达的影响 目的：探讨tamoxinfen(TAM，它莫西芬)阻断ER后，GST对离体培养的帕金森病模型多巴胺能神经元以及促凋亡蛋白bax表达的影响。方法：取孕14～16天SD大鼠胚胎中脑腹侧，常规体外培养。将培养的中脑腹侧细胞分为四组：正常对照组、GST+MPP~+组、TAM+GST+MPP~+组、MPP~+组。用TH免疫细胞化学染色观察各组TH阳性神经元的生长状况。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力和代谢状态。用Western Blot观察各组bax蛋白的表达情况。结果：TAM+GST+MPP~+组与正常对照组和GST+MPP~+组相比，TH阳性神经元数量有所减少，突起长度变短，bax蛋白的表达量增加，差异有统计学意义。TAM+GST+MPP~+组与正常对照组和GST+MPP~+组相比，细胞活力差，差异有统计学意义。同时MPP~+组与正常对照组，E_2+MPP~+组以及TAM+GST+MPP~+组相比，TH阳性神经元数量减少，突起长度短，bax蛋白的表达量最多，细胞活力最差，差异均有统计学意义。结论：TAM具有部分下调GST对多巴胺能神经元保护作用的功能；GST在体外对多巴胺能神经元的保护作用除了通过ER发挥类雌激素样保护作用外，还可能经其他途径发挥保护作用；bax蛋白在神经元受损后表达增加，表明bax在多巴胺能神经元的凋亡过程中起重要的作用。
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图片说明： 大学硕十学位论文第二△TAM+GST+MPP+组与正常对照组和GST+MPP十组比较，P<0.05*MPP+组与正常对照组、GST+MPP+组和TAM+GST+Mpp+组比较P<0.05。三)WestemBlot结果(见图11)三次凝胶电泳结果均显示，，MPP+组的bax蛋白表达明显增GST+MPP十组TAM+GST+MPP+组和正常对照组相比，有明异。GST+MPP+组与正常对照组相比无明显的差异，飞人M+MPP+组与正常对照组和GST+MPP+组相比有明显的差异，各对灰度值见表6:
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图片说明：7B，7C，7D:分别示正常对照组、GST十MPP十组、TAM十GST+N田P十组、N于P+组单极突起TH阳性神经元B护50pm
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R338

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本文编号：2515457