防治巨细胞病毒感染的核酸疫苗及新型抗病毒药物的研究

发布时间：2019-07-21 14:10

【摘要】：人巨细胞病毒(HCMV)是胎儿宫内感染和围产期感染的重要病原,以及因免疫抑制剂、器官和骨髓移植、艾滋病等所致免疫低下患者患严重感染的重要病原体之一,妊娠妇女感染HCMV可通过胎盘传染给胎儿,导致胎儿发育迟缓、畸形、低体重儿、黄疸、皮疹等。HCMV也是器官移植失败和艾滋病病人并发感染死亡的主要原因,对非免疫缺陷者常导致长期隐性感染或出现非特异症状,甚至引起感染细胞的转化、畸变或癌变,同时也与多种肿瘤的发生相关,如宫颈癌、前列腺癌、结肠癌及卡波济肉瘤。 HCMV主要糖蛋白gB广泛表达在病毒颗粒及感染细胞表面,具有被病毒中和抗体识别的抗原表位,能特异性的诱导机体的免疫反应,因此被认为是HCMV疫苗的重要候选蛋白,制备巨细胞病毒gB疫苗,对于巨细胞病毒感染所诱发的疾病可起到积极的防治作用。目前许多抗病毒药物对HCMV感染引起的相关疾病有较好的疗效,但对需要长期维持治疗的病人常产生耐药现象,且均存在不同程度的毒性作用,给临床治疗带来困难。因此,研制新型抗HCMV药物,对于HCMV感染引起的相关疾病的治疗是非常必须的。研究内容: 一、HCMV主要包膜糖蛋白gB疫苗的构建及免疫原性检测 1.利用分子生物学技术构建构建人巨细胞病毒(HCMV)包膜糖蛋白gB真核基因表达载体pCMV.gB。 2.初步评价其作为核酸疫苗在小鼠体内的免疫效果通过皮下接种免疫小鼠,测量小鼠的体温、体重等一般情况,利用LDH释放试验检测免疫小鼠的NK细胞活性,MTT法检测T细胞增殖活性、IL-2活性,ELISA方法检测小鼠的抗HCMV IgM、IgG抗体及IL-2、IL-4含量。实验结果显示:成功构建gB表达载体pCMV.gB,用其免疫小鼠后,
【图文】：

pCMv.gB质粒构建示意图
EeoRI/BamHI酶切pCMv.gB载体;..

1.HC柳核酸疫苗pCMV.gB质粒的构建:以pCAGGS.gB质粒和pcDNA3为模板，分别用BamHI/EcoRI双酶切，将酶切产物连接，转化，挑取阳性菌落，提取质粒，分别用Ec0RI和BamHI进行酶切鉴定，电泳结果如图1一2所示，可见切开的两条阳性条带，证实pCMV.gB质粒构建成功。图1一2EeoRI/BamHI酶切pCMv.gB载体;F191一2.pCMV.gBveetoreutedbyEeoRI/BamHI;Ml:入Hind111DNAMarker;MZ:DL2000DNAMarker;l:pCMV.gB/EeoRI/BamHI:2:pCMV.gB/BamHI;3:pCMV.gB/EeoRI;2.小鼠一般状况检测结果:免疫组小鼠一般状况良好，，精神、饮食、皮毛、分泌物等情况与正常对照组小鼠无显著性差异;分别于0、2、4、6、8、10周测定免疫小鼠的体重，并绘制增长曲线，体重随着时间的延长而增长，但两组之间无差异;说明HCMVgB核酸疫苗对免疫小鼠无毒性。图1一3免疫小鼠体重曲线Figl一3.The份eightofmiee
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

【参考文献】