人骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞的免疫调节及抗肿瘤效应的影响

发布时间：2019-07-21 20:51

【摘要】： 目的 建立骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)培养、扩增与鉴定及外周血T淋巴细胞分离、纯化的方法；观察MSCs及上清对T淋巴细胞增殖及分泌IL-4、IFN-γ的影响；MSCs对T淋巴细胞增殖影响的可逆性研究；MSCs对T淋巴细胞杀伤K562细胞的影响并探讨可能机制。 方法 密度梯度离心法分离出单个核细胞，，细胞贴壁法培养并扩增MSCs，倒置相差显微镜观察MSCs细胞形态，流式细胞术检测MSCs表面抗原、地塞米松诱导MSCs向脂肪细胞分化；尼龙棉柱法从外周血分选出T淋巴细胞，流式细胞术进行鉴定；MTT法测定MSCs对T淋巴细胞增殖的影响，ELISA法检测反应体系中IFN-γ、IL-4的分泌；MTT法测定MSCs对T淋巴细胞增殖影响的可逆性；LDH法检测T淋巴细胞对K562细胞的杀伤，ELISA法检测反应体系IFN-γ、IL-4的分泌，流式细胞术检测CD4~+、CD8~+、CD4~+D25~+T淋巴细胞的比例。 结果 MSCs形态均匀一致，生长曲线显示增殖能力强，流式细胞仪检测显示CD44、CD13高表达，经地塞米松诱导后MSCs向脂肪细胞分化，尼龙棉柱法分离的单个核细胞其CD3阳性细胞高表达；MSCs及上清对T淋巴细胞增殖表现为抑制效应；MSCs及上清抑制T淋巴细胞IFN-γ的分泌，MSCs促进T淋巴细胞IL-4的分泌，上清本身并不能促进IL-4分泌；MSCs对T淋巴细胞增殖抑制具有可逆性；MSCs处理的T淋巴细胞CD4~+、CD4~+CD25~+亚群升高，MSCs减弱了T淋巴细胞对K562细胞的杀伤效应，同时IFN-γ分泌减少、IL-4分泌增加。 结论 本实验获得性能可靠的MSCs及T淋巴细胞；MSCs及上清对T淋巴细胞增殖表现为抑制效应，其作用机制可能包括直接接触及分泌细胞因子两种途径；MSCs及上清抑制T淋巴细胞IFN-γ的分泌，MSCs却促进T淋巴细胞IL-4的分泌，MSCs可能通过改变T淋巴细胞分泌细胞因子的种类和数量影响T淋巴细胞增殖：MGCs对T淋巴细胞增殖抑制具有可逆性，MSCs可能不通过凋亡途径抑制T淋巴细胞的增殖；MSCs减弱了T淋巴细胞对K562细胞杀伤效应，与CD4~+、CD4~+CD25~+T淋巴细胞比例增加及IFN-γ、IL-4分泌水平改变相关。
【图文】：

细胞生长第12天，光镜下细胞呈梭形分布，圆形或类圆形外观，核大，多数居中，少数易位，胞浆丰富，呈紫红色

光镜下贴壁细胞呈典型的长梭形外观，呈旋涡状、网状、辐射状或平行状生长。(瑞氏染色 1x40)图3图4细胞生长第12天，光镜下见细胞迅速增生，形成集落并相互融合成片。(瑞氏染色lx40)细胞生长第8天，(瑞氏染色lx100)光镜下贴壁细胞呈长梭形，核偏大，胞浆丰富。图5细胞生长第12天，光镜下细胞呈梭形分布，圆形或类圆形外观，核大，多数居中，少数易位，胞浆丰富，呈紫红色。(瑞氏染色 1x400)二、骨髓MSCs生长曲线的测定原代MSCs接种后前4天曲线平缓，为细胞生长的潜伏期;第5一8天，?
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R329.2

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本文编号：2517405