人运动神经元生存蛋白Tudor功能域片段的克隆，表达

发布时间：2019-08-07 13:06

【摘要】： 目的：构建含有人SMN Tudor基因片段的原核表达质粒，并在大肠杆菌中大量表达，从而与p100 Tudor片段结构和功能进行比较。 方法：利用聚合酶链反应(PCR)方法，扩增出人SMN Tudor基因序列，并与原核表达载体pGEX-4T-1连接形成重组质粒转化至作为质粒的宿主菌大肠杆菌BL21株中，经IPTG诱导融合蛋白表达并用还原型谷胱甘肽S转移酶特异性结合球珠纯化融合蛋白。用同样的方法表达p100 Tudor蛋白片段融合蛋白。SMN Tudor融合蛋白与p100 Tudor融合蛋白分别与HeLa细胞核裂解液中蛋白结合，并进行比较。 结果：PCR法获得SMN Tudor基因序列，长度为183bp，成功构建了表达载体pGEX的重组质粒。重组质粒pGEX-4T-SMN Tudor经PCR鉴定，酶切鉴定和测序后在大肠杆菌BL21株中成功表达GST-SMN Tudor融合蛋白。通过比较可以看出p100 Tudor片段与SMN Tudor片段结合HeLa细胞核裂解液蛋白种类并不完全相同。 结论：构建了表达载体pGEX-4T-SMN Tudor并表达出融合蛋白，，SMNTudor蛋白片段与p100 Tudor蛋白片段结合核蛋白种类不尽相同。本研究为下一步比较研究p100蛋白和SMN蛋白功能域片段功能奠定基础。
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