hTGF-β1对大鼠软骨细胞及小鼠淋巴细胞生物学特性的影响

发布时间：2019-08-12 15:40

【摘要】：目的: 研究细胞因子hTGF-β1对小鼠的淋巴细胞生物学行为的影响,以及hTGF-β1基因修饰的大鼠软骨细胞生物学功能的改变,初步探讨其作用机制。为寻找理想的软骨组织工程种子细胞、并开发新的异种移植排斥治疗和预防方法奠定基础。 方法: 将hTGF-β1细胞因子作用于小鼠淋巴细胞,利用荧光抗体标记及Annexin V和7-AAD双染色,结合流式细胞术检测对多克隆刺激剂作用下的淋巴细胞CD69及CD25表达水平及Annexin V~+/7-AAD~-细胞比例,判断T细胞的活化与凋亡水平;~3H-TdR同位素掺入法检测淋巴细胞的增殖情况。另一方面,利用优化的电穿孔转染技术将pEGFP-TGF-β1-N1表达载体导入大鼠原代培养的软骨细胞中,流式细胞仪检测荧光表达率,荧光显微镜观察荧光表达情况,同位素掺入法检测软骨细胞生物学功能。 结果: 小同剂量hTGF-β1对于多克隆刺激剂作用的小鼠T细胞的活化较对照组均无明显抑制作用;但可以抑制其增殖以及促进活化诱导的淋巴细胞凋亡,并在一定范围内呈剂量依赖关系。流式细胞仪可以检测到成功构建的
【图文】：

同时各刺激剂组相邻实验组之间也有较明显的差异(凡0.05):对于PDB+I。n刺激的淋巴细胞也观察到几乎一致的结果，差别在于该刺激组的中、低剂量两组之间未见差异(乃0.05)(表2一3、图2一3);附图2一2为一次实验的流式图。表2一3与hTGF一pl共孵育的淋巴细胞在多克隆刺激剂作用下4Sh的凋亡情况Tab.2一3ApoPtosisoflymPhocyteseoculturedwithhTGF一plinresponsetoPolyelonalaetivationorf48hours(%，牙士s，n=6)stimulus(5林g/ml)hTGF一旦1(ng)PereentageofAnnexinv+/7一AAD(%)NoneConA0.30.03PDB+Ion0.30.037.00士1.2623.17士5.71a48.32士3.05网37.44士1.98be34.2士1.84b23，21士1.82a42.63士2.76e堆39.74士2.16e36.48士2.88ea尸<0.01vsNone，b尸<0.05vseo叭，“尸<0.05vseo叭+o.o3nghTor一pl，d作0.05vseo叭+0.3ng盯GF一p一，c尸<o.osv、PoB+一on

E.2.N.A.小量质粒抽提试剂盒抽提质粒，双酶切鉴定阳性克隆，并测序。(pEGFP一TGFpl一N1载体构建示意图及pEGFP一Nl多克隆位点见图3一l)。软骨细胞的分离与培养参见第一章。2.3细胞转染与培养收集培养瓶中原代生长状态良好的软骨细胞悬液并计数，取密度为lx1护Cel〕Sm/L细胞进行实验。利用Amxaa细胞核转染仪将载体转入软骨细胞，采用optimizedprotoeolratchonaroeytenucleoefetoTrMKit，选择程序U24，分别加入100林L细胞悬液与5林g的pEGFP一Nl空载体以及重组载体DNA。具体操作按Amaxa
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

【参考文献】

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本文编号：2525803