痢疾杆菌福氏2a 2457T的比较蛋白质组学研究

发布时间：2019-08-19 13:15

【摘要】：痢疾困扰人类多年，但迄今没有很好的疫苗，主要是因为对它的致病机理了解不够，扩展痢疾的生物学基础的研究必将对疫苗研究提供新思路。随着微生物基因组测序工作的迅速展开，痢疾杆菌福氏2a 2457T和301的全基因组序列现在已经完成测定，并且痢疾杆菌福氏2a 2457T的蛋白质表达谱也已经建立，这为我们进行蛋白质组学研究提供了坚实的基础。蛋白质组学技术是在整体水平研究蛋白质表达与功能，其特点是高通量、获得的信息量大。我们选择普遍用于痢疾杆菌遗传学与病原学研究的2457T进行蛋白质组学研究，积累痢疾杆菌的基础知识并希望能为新疫苗研制找到新的思路。 首先是分别制备2457T全细胞蛋白与培养液上清中的胞外蛋白，然后通过双向电泳分离、从电泳凝胶上切取蛋白质点进行胶内酶切、MALDI-TOF质谱检测肽质量指纹图谱，最后用Mascot软件在相应的数据库中搜索与之匹配的蛋白质。本论文研究内容共分两个部分，第一部分是驱除痢疾杆菌福氏2a 2457T的侵袭大质粒pINV构建新菌株2457T／inc并研究其蛋白质组变化；第二部分是研究冷热休克处理和酸处理对痢疾杆菌福氏2a 2457T蛋白质组的影响。我们在这两部分研究中总共发现了45个差异蛋白质，其中第一部分有17个差异蛋白质，第二部分有28个差异蛋白质。 在驱除大质粒的的研究中，我们发现在总共17个蛋白质差异点中，几乎所有上调的蛋白质都是与核酸的代谢和转运有关的，，β-内酰胺酶除外(它的表达量上调是构建2457T／inc菌株时所引入的小质粒表达造成的)。这个现象向我们提示，驱除侵袭大质粒使得痢疾杆菌的核酸代谢旺盛起来，但是这些高表达的与核酸代谢相关的酶和侵袭大质粒的关系还有待于进一步研究来验证。由于双向电泳本身的技术限制等因素，我们并没有发现与痢疾杆菌致病相关的毒力因子。 在冷热休克处理和酸处理的研究中，我们发现总共28个差异蛋白质中变化较
【图文】：

图2pH-3lo分离2457T全细胞蛋白的银染双向电泳图谱Fig.2TheZ一DAPGEmpabaoutWholeeellularProteinexrtactsof.s刀xeneri·UsingPH3一10irnrnobilizedPHgradientdyrstriPnadstainedwithsilverstain.将2457T胞外蛋白质也用pH3一10的PIG胶条进行双向电泳，银染所得电泳图如图3。

图3pH3一10分离2457T胞外蛋白的银染双向电泳图谱F19.3TheZ一DAPGEmpabaoutextrocellularProteinextractsof.S刀xener才.UsingPH3一10immobilizedPHgrdaienidyrstriPnadstained诚thsilverstain.从胞外蛋白质的电泳图上也可以看出痢疾杆菌福氏Za2457T的胞外蛋白也集中分布在pH4一7之间，并且胞外的蛋白质明显少于胞内蛋白质。在pH3一10的双向电泳图谱中发现2457T的可溶性蛋白质大部分集中在pH4一7，而且在pH3一10的凝胶上蛋白质点过于密集，不便于切胶取点鉴定，决定用pH4一7的PIG胶条进一步分离蛋白。图4显示的是pH4一7的痢疾杆菌福氏Za2457T的胞内蛋白双向电泳的银染图。
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R378.25

【参考文献】

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1 谢玲,应万涛,张开泰,项小琼,钱小红,王玉芝,吴德昌;双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年05期

2 冯尔玲,廖翔,王恒j,史兆兴,苏国富,黄留玉;驱除痢疾杆菌侵袭大质粒的新方法[J];微生物学通报;2003年03期

本文编号：2528278