一 鹦鹉热嗜衣原体MOMP基因重组质粒的构建和免疫效果的初步研究 二 衣原体分子甄别技术的建立

发布时间：2019-08-26 10:58

【摘要】：鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci，Cps)是一类专性细胞内寄生的人兽共患病病原体，，能引起人和动物多种疾病。Cps对鸟类、家禽和家畜有很强的感染性。人类不是Cps的天然宿主，但宠物饲养者、养禽厂工人等与家禽家畜密切接触者可通过吸入具有感染性的分泌物而感染，引起肺炎和败血症。 Cps主要外膜蛋白(major outer membrane protein，MOMP)是呈感染性的原体(elementary body，EB)表面的主要膜蛋白，在原体的外膜蛋白中占60％左右。氨基酸序列分析表明，MOMP的结构是五个保守区夹着四个可变区(variable domain，VD)，血清型特异的抗原决定簇位于VS1或VS2，而种或亚种特异的抗原决定簇位于VS4。 本研究采用PCR法获得了Cps CE9株MOMP基因片断，并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中，构建了重组表达质粒。通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)以及酶切方法对重组质粒进行了鉴定，结果表明外源基因已经成功地插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。通过对重组质粒进行序列测定，结果表明目的基因已经成功地克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，且表达载体含有目的基因正确的开放读码框。测序结果与Cps其它菌株进行序列比对可知，该序列只有三个碱基突变，重组质粒上MOMP基因的氨基酸序列同标准序列的同源性为99.6％。起始密码子ATG后的第一个碱基为G，前面的碱基为AAC，目的基因上已经含有外源基因转录必需的Kozak序列。 利用磷酸钙法介导重组质粒转染COS-7细胞，Western Blot方法鉴定外源蛋白在COS-7细胞中的表达情况，结果表明外源基因可以成功的在COS-7细胞中进行表达。用重组质粒对Balb／c小鼠进行免疫，采用间接ELISA法分析特异抗体的产生。经过3次免疫，小鼠产生了衣原体MOMP特异的抗体反应，血清抗体滴度随时间变化呈逐渐上升的趋势，并持续较长的时间。本研究为核酸疫苗的深入研究提供了依据。
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346

【参考文献】

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本文编号：2529244