慢病毒肌肉注射介导人FVIII基因在大鼠体内的表达

发布时间：2019-09-03 17:14

【摘要】： 目的本研究制备携带人凝血因子Ⅷ(hFⅧ)基因的重组慢病毒，并肌肉注射到正常大鼠股四头肌，观察体内的表达。 方法将含hFⅧ基因的慢病毒载体与包装质粒CMV△R8.74、包膜质粒VSV-G转染产毒细胞293T细胞，以制备包含EPO cDNA的重组慢病毒。将制备好的重组慢病毒感染HeLa细胞，检测培养上清中hFⅧ的表达量；直接肌肉注射正常大鼠后，检测血浆中hFⅧ抗原浓度和抗体。取注射部位组织中提取DNA进行PCR。 结果48h后取上清测定hFⅧ抗原高表达(0.7±0.1)ng／ml。将制备好的重组慢病毒(1×10~8IU／ml)直接肌肉注射到正常大鼠后血清中可检测到高水平的hFⅧ抗原，最高达(33.1±0.1)ng／ml，，持续时间长达20周。血清hFⅧ抗体第1周最高达(133.1±5.6)BU／ml，持续到实验期间。除在注射部位组织外，其它主要脏器均未观察到hFⅧ基因的存在。 结论制备的重组慢病毒在培养细胞中高水平表达，肌肉注射后在正常大鼠体内能构建并长时间稳定表达，为血友病A基因治疗提供理论和实验依据。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346

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本文编号：2531483