μ型阿片受体与催产素受体二聚化的研究

发布时间：2019-09-07 17:37

【摘要】： 吗啡有多种药理学作用,包括镇痛、调节免疫功能和神经内分泌等。我们以往的工作表明,慢性吗啡处理将导致中枢催产素(oxytocin,OT)的合成和分泌功能障碍,国外的研究也显示吗啡依赖大鼠的孕期和产程均延长,提示吗啡可抑制OT的分泌和合成,但其分子机制不清楚。 MOR和催产素受体(OTR)同属于G蛋白耦联受体(GPCRs)的A家族,二者都可以形成同源二聚体和异源二聚体。本工作是从受体的水平探索吗啡抑制催产素合成与释放效应的分子机制,并运用生物化学和生物物理的方法观察MOR和OTR间是否存在着直接的相互作用,以探讨吗啡作用的新途径,为阿片类药物的临床应用提供分子生物学实验资料。 本工作首先应用体外重组技术在PIRES载体上构建可以在哺乳动物细胞内同时表达的myc-OTR和flag-MOR目的基因。将质粒转染CHO/COS7细胞,经双标免疫荧光染色和confocal荧光显微镜观察MOR蛋白和OTR蛋白在转染细胞中的表达和共定位情况。运用免疫共沉淀(IP)方法证实MOR和OTR异源二聚体存在于体外培养细胞和大鼠脑组织中。并进一步在荧光载体上构建与青色荧光蛋白(CFP)融合表达的MOR和与黄色荧光蛋白(YFP)融合表达的OTR蛋白。运用生物物理学方法观察MOR和OTR分子在活细胞内相互作用,进一步证实在活细胞内MOR和OTR异源二聚体的形成。 结果表明,在大鼠脑组织和不同细胞株中均存在MOR-OTR异源二聚体,FRET显示在活细胞内可以观察到MOR-OTR异源二聚体的形成。
【图文】：

一1Pl耽S一MOR克隆的构建图

一2Pl邢SMOR一OTR克隆的构建图
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：Q4

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本文编号：2533156